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1、胸腔积液DNA倍体分析的临床应用吕 程 丁燕玲 刘 宇 蒋洪昆 黎华莲作者单位:广西柳州市人民医院检验科邮 编 545001 收稿日期 2008-06-13【摘要】 目的 探讨胸水脱落细胞DNA倍体分析的临床应用价值。方法 应用流式细胞术测定35例胸水脱落细胞DNA含量,并与细胞学检查进行比较分析。结果 流式细胞术DNA倍体分析用于恶性胸腔积液诊断的阳性率为73.33%,敏感性为79.00%,特异性为95.24%,准确性为87.50%。结论 胸腔积液脱落细胞DNA倍体分析,有助于判断胸水的良恶性质。对于了解肿瘤细胞的增殖情况
2、及恶性程度有重要的临床意义。【关键词】 胸腔积液 DNA倍体分析 流式细胞术用流式细胞术(FCM)进行DNA倍体分析,在肿瘤学及其他疾病的诊断中已获得广泛的应用,本实验应用流式细胞术测定胸腔积液脱落细胞DNA含量,探讨DNA倍体分析在胸腔积液中的临床应用价值。1 资料与方法1.1 研究对象 2007年4月～2008年2月本院收治的胸腔积液患者35例。男21例,女9例,年龄32～80岁,平均年龄(56.6±10.2)岁。全部病例均经临床最终确诊。恶性肿瘤15例,其中肺癌12例,乳腺转移癌2例,胃癌1例。非恶性肿瘤20例,其中结核性
3、胸膜炎7例,肝硬化1例,肺部感染12例。所有检查均采用同一次抽取的胸水标本。1.2 仪器与试剂 仪器采用美国BDBiosciences公司生产的BDFACSCalibur型流式细胞仪及DNA倍体分析配套试剂盒。1.3 试验方法1.3.1 流式细胞仪DNA含量测定 用800～1000r/min离心沉淀收集新鲜胸水中的细胞,用PBS洗涤2次,用350目的滤网过滤除去细胞团块,将脱落细胞数调整为1×106个/ml,按照DNAStainKit说明书进行操作,用CellQuest软件自动获取50000细胞/样品,再用ModFitLT2.0
4、软件进行分析,同时以正常人外周血淋巴细胞作为正常二倍体对照,被测标本细胞DNA含量峰值与对照标本细胞二倍体峰值之比为DNA指数(DI),二倍体DI为(1±0.1),DI不在(1±0.1)范围者为异倍体。1.3.2 细胞学检测 胸水经离心沉淀后制片用苏木素伊红染色光镜下观察脱落细胞形态。阳性为发现肿瘤细胞。1.4 统计学处理 率的比较采用χ2检验。2 结果DNA倍体分析结果和细胞学检查结果比较:15例胸腔积液DNA异倍体阳性率较细胞学检查阳性率高,但无统计学意义(P>0.05)。35例胸腔积液DNA倍体分析与细胞学检查的敏感性、特
5、异性、准确性均无显著差异(P>0.05)。结果见表1。表1 35例胸腔积液各组结果比较 恶性胸液15例 良性胸液20例 敏感性%特异性%准确性%阳性阴性阳性率%阳性阴性阳性率%DNA异倍体11473.331195.079.0095.2487.50细胞学8753.30020068.1810083.333 讨论胸腔积液是胸膜疾病最常见的临床表现,其发病机制复杂,根据病因可大致分为恶性胸腔积液和良性胸腔积液,鉴别两者时很困难,脱落细胞学检查是诊断恶性胸腹水强有力的证据,但灵敏度较差,易于漏诊。近年来应用流式细胞仪检测DNA含
6、量,作为检测肿瘤细胞的一个标志,已得到越来越多的临床医师重视。正常人体细胞具有较恒定的DNA含量,为整倍体细胞,处于S期的细胞仅占少数,但肿瘤组织常发生染色体突变,结果导致异倍体细胞的出现和S期细胞比例增高。国外有文献报导DNA倍体分析在恶性胸腔积液方面有较好的临床应用价值[1]。本法采用FCM测定胸腔积液DNA的含量以异倍体作为诊断恶性胸水的标准,结果显示,阳性率为73.33%,敏感性为79.00%,特异性为95.24%,准确性为87.50%。其阳性率明显高于细胞学检查。这可能是由于在癌前病变时DNA倍体发生改变,出现异倍体随
7、细胞增生程度而提高,而此时细胞形态尚未发生改变[2]。因此胸腔积液异倍体的存在高度提示恶性病变,因进一步进行胸膜活检和反复细胞学检查。由于实验原理,利用FCMDNA倍体分析来判断胸水的良恶性质存在一定的假阳性和假阴性。造成假阴性属不可避免,主要原因是肿瘤细胞未脱落至胸腔或肿瘤本身为二倍体细胞。假阳性可能与在标本制备过程中某些染色体发生机械性缺失有关,尽管存在一定的假阳性和假阴性,本实验的准确性还是达到87.50%,与文献报导相符[3],表明FCMDNA倍体分析在良恶性胸腔积液的鉴别中可作为一项重要的参考指标,另外FCMDNA检测
8、可以进行细胞周期分析,了解细胞的增殖能力,有研究报导,DI值越高,生存期越短,异倍体肿瘤的S期细胞较二倍体肿瘤高,提示异倍体肿瘤的增殖活性高,生长快,侵袭力强,预后差[4]。总之,利用FCM进行细胞DNA定量分析,对鉴别良恶性胸腔积液有一定的临床价值,联合细胞学
