微生物实验课PPT.ppt

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1、微生物与免疫学实验(三)内容血清学反应(二):(三)免疫标记技术(录像)操作:ELISA示教:免疫荧光(C301)细菌学总论:细菌基本形态、特殊结构操作:革兰染色(三)免疫标记技术将已知抗体标记上显示性物质,通过检测标记物,反映有无抗原抗体反应,从而间接测出微量的抗原或抗体。常用的标记物有:酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致密物等。免疫荧光技术(荧光抗体技术)【原理】是在免疫学、生物化学及显微镜术进展的基础上发展起来的一项技术,具有特异、敏感、快速的特点。将荧光色素(常用异硫氰基荧光黄,简称FITC)与特异性抗体(或抗原)以共价键基团牢固结合,但不影响该血清

2、抗体的免疫特性。这种荧光标记的抗原抗体复合物,可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光,而从荧光显微镜加以观察。【方法】主要有直接法和间接法。免疫荧光酶联免疫吸附试验(ELISA) (EnzymelinkedlmmunosorbentAassay)【原理】把抗原抗体的免疫反应和酶(主要有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)的高效催化作用有机地结合起来,并仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时,可以催化底物水解、氧化或还原,从而产生有色的物质。颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。【方法】主要有间接法和双抗体夹心法常用底物:邻苯二胺(OPD)

3、,四甲基联苯胺(TMB)用于测定抗体ELISA:双抗体夹心法------用于测定抗原ELISA:双抗体夹心法检测HCG(操作)器材:1个小杯/1人,标本1、标本2A、B、C液(H2O2、TMB、HRP标记抗HCG二抗)方法:小杯内加标本两滴甩干、水洗三次加一滴C液(红色)甩干、水洗三次加A、B液各一滴置于白纸上,观察结果结果判断:蓝色为+*瓶盖不能盖错,小杯用后扔进杂物盆!!!5min5min示教:荧光标记技术老鼠肝细胞印片+SLE病人血清(含有抗核抗体,一抗)+荧光标记的抗人的抗核抗体的抗体(二抗)荧光显微镜(C-301)下观察:黄绿荧光标记的老鼠肝脏细胞核细菌总论(一

4、)革兰染色法:1884年Gram创建,是细菌学中最为经典的染色法。意义:对细菌鉴别、选择抗菌药物、研究细菌致病性等有重要意义。原理:与细菌细胞壁有关,尚未完全阐明。细菌的基本形态细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物,形体微小,一般以微米(µm)作为测量单位。细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三大类。不同种类的细菌大小不一,大多数球菌直径约1µm,杆菌长2∼5µm,宽0.3∼1µm。球菌(coccus)葡萄球菌G+淋病奈瑟氏菌G-杆菌(bacillus)大肠杆菌G-螺形菌(spiralbacterium)弧菌:一个弯曲螺菌:多个弯曲霍乱弧菌空肠弯曲菌细菌的特殊结构荚膜、鞭毛

5、、芽胞、菌毛荚膜(Capsule)荚膜:细菌细胞壁外包裹的一层较厚、粘性、胶冻样的物质,普通染色不易着色。主要功能:1.与细菌的毒力有关,抗吞噬、抗消化2.潴留水分,抗干燥一般在机体内和营养丰富的培养基中形成肺炎双球菌鞭毛(flagellum)多种细菌(大多数杆菌,少数球菌,全部弧菌和螺菌)菌体上有细长而弯曲的丝状物,称为鞭毛芽胞(spore)芽胞(spore):是细菌躲避恶劣环境,维持生存而处于代谢相对静止的休眠体,并非细菌的繁殖体,折光性强,不易着色。能产生芽孢的细菌为G+菌。菌毛(pilus)菌毛(pilus):菌体表面遍布,细、短、直、硬。分普通菌毛(粘附作用、致

6、病性)、性菌毛(传递DNA)。电镜可见。革兰染色操作步骤【涂片】取载玻片接种环取混合菌液1-2环涂片(直径约1cm)自然干燥固定(通过火焰三次)【染色】结晶紫1min水洗碘液1min水洗酒精脱色30S水洗稀释复红1min水洗吸水纸印干油镜观察*注意无菌操作!有菌玻片放在水池旁玻片缸内!作业:1.作图—细菌基本形态、特殊结构2.ELISA:原理、方法、结果、结论3.革兰染色:方法、结果(图)作图请注意大小比例此课件下载可自行编辑修改,供参考!部分内容来源于网络,如有侵权请与我联系删除!

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