微生物实验课PPT.ppt

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1、微生物与免疫学实验（三）内容血清学反应（二）：（三）免疫标记技术（录像）操作：ELISA示教：免疫荧光（C301）细菌学总论：细菌基本形态、特殊结构操作：革兰染色（三）免疫标记技术将已知抗体标记上显示性物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。常用的标记物有：酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致密物等。免疫荧光技术（荧光抗体技术）【原理】是在免疫学、生物化学及显微镜术进展的基础上发展起来的一项技术，具有特异、敏感、快速的特点。将荧光色素（常用异硫氰基荧光黄，简称FITC）与特异性抗体（或抗原）以共价键基团牢固结合，但不影响该血清

2、抗体的免疫特性。这种荧光标记的抗原抗体复合物，可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光，而从荧光显微镜加以观察。【方法】主要有直接法和间接法。免疫荧光酶联免疫吸附试验（ELISA）（EnzymelinkedlmmunosorbentAassay）【原理】把抗原抗体的免疫反应和酶（主要有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）的高效催化作用有机地结合起来，并仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或还原，从而产生有色的物质。颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。【方法】主要有间接法和双抗体夹心法常用底物：邻苯二胺（OPD）

3、,四甲基联苯胺（TMB）用于测定抗体ELISA：双抗体夹心法------用于测定抗原ELISA：双抗体夹心法检测HCG（操作）器材：1个小杯/1人，标本1、标本2A、B、C液（H2O2、TMB、HRP标记抗HCG二抗）方法：小杯内加标本两滴甩干、水洗三次加一滴C液（红色）甩干、水洗三次加A、B液各一滴置于白纸上，观察结果结果判断：蓝色为+*瓶盖不能盖错，小杯用后扔进杂物盆！！！5min5min示教：荧光标记技术老鼠肝细胞印片+SLE病人血清（含有抗核抗体，一抗）+荧光标记的抗人的抗核抗体的抗体（二抗）荧光显微镜（C-301）下观察：黄绿荧光标记的老鼠肝脏细胞核细菌总论（一

4、）革兰染色法：1884年Gram创建，是细菌学中最为经典的染色法。意义：对细菌鉴别、选择抗菌药物、研究细菌致病性等有重要意义。原理：与细菌细胞壁有关，尚未完全阐明。细菌的基本形态细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物，形体微小，一般以微米（µm）作为测量单位。细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三大类。不同种类的细菌大小不一，大多数球菌直径约1µm，杆菌长2∼5µm，宽0.3∼1µm。球菌(coccus)葡萄球菌G＋淋病奈瑟氏菌G－杆菌(bacillus)大肠杆菌G-螺形菌(spiralbacterium)弧菌：一个弯曲螺菌：多个弯曲霍乱弧菌空肠弯曲菌细菌的特殊结构荚膜、鞭毛

5、、芽胞、菌毛荚膜（Capsule）荚膜：细菌细胞壁外包裹的一层较厚、粘性、胶冻样的物质，普通染色不易着色。主要功能：1.与细菌的毒力有关，抗吞噬、抗消化2.潴留水分，抗干燥一般在机体内和营养丰富的培养基中形成肺炎双球菌鞭毛（flagellum）多种细菌（大多数杆菌，少数球菌，全部弧菌和螺菌）菌体上有细长而弯曲的丝状物，称为鞭毛芽胞（spore）芽胞（spore）：是细菌躲避恶劣环境，维持生存而处于代谢相对静止的休眠体，并非细菌的繁殖体，折光性强，不易着色。能产生芽孢的细菌为G+菌。菌毛（pilus）菌毛(pilus)：菌体表面遍布，细、短、直、硬。分普通菌毛（粘附作用、致

6、病性）、性菌毛（传递DNA）。电镜可见。革兰染色操作步骤【涂片】取载玻片接种环取混合菌液1-2环涂片（直径约1cm）自然干燥固定（通过火焰三次）【染色】结晶紫1min水洗碘液1min水洗酒精脱色30S水洗稀释复红1min水洗吸水纸印干油镜观察*注意无菌操作！有菌玻片放在水池旁玻片缸内!作业：1.作图—细菌基本形态、特殊结构2.ELISA：原理、方法、结果、结论3.革兰染色：方法、结果（图）作图请注意大小比例此课件下载可自行编辑修改，供参考！部分内容来源于网络，如有侵权请与我联系删除！