2014级硕士高级免疫学实验技术概述ppt课件.ppt

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1、高级免疫学实验技术2014级硕士研究生吉林大学基础医学院免疫学系免疫学实验技术概述免疫学实验技术概述小调查-对免疫学实验技术的了解目前你知道的免疫学实验技术有哪些？这些免疫学实验技术的原理是什么？这些技术有什么应用？免疫学实验技术概述现代免疫学技术免疫学技术的范畴1、对具有免疫活性物质的定性、定量测定2、对免疫系统的组成成分的数量、状态的测定免疫学检测技术的评价一、评价标准Specificity（特异）Sensitivity（敏感）Simplicity（简便）Safety（安全）Saving（节约

2、）二、特异性与敏感性的关系特异性高、敏感性低敏感性高、特异性低免疫学实验技术概述抗原抗体反应淋巴细胞的检测技术细胞因子的检测技术免疫学常用的分子生物学技术多克隆抗体单克隆抗体基因工程抗体前两者常用于实验研究，而后者用于临床治疗研究。抗体的应用多克隆抗体是通过免疫动物血清分离获得优点：制备方法比较简单，价格低廉，制备所需时间短等在确定新基因编码蛋白研究方面，仍然是首选抗体类型。但由于多克隆抗体含有针对多个抗原表位的抗体成分，也可能包括抗原变性后暴露的新抗原表位，因此，多克隆抗体在检测变性抗原——如采

3、用WesternBlot检测蛋白时，其效果比单克隆抗体更敏感。多克隆抗体缺点：纯度差易发生交叉反应来源有限所产生的抗体因动物个体差异滴度不同不易标准化因免疫动物血清中含有非常复杂的多种蛋白质成分，所以在进行实验室分析、检测之前，必须将其有效的抗体成分分离、纯化。多克隆抗体单克隆抗体(mAb)是通过B细胞杂交瘤获得与多克隆抗体相比，单克隆抗体主要具有以下三个显著特点（优点）：①高度均质性②高度特异性③来源稳定不足：制备方法比较复杂，价格昂贵，制备所需时间较长。单克隆抗体根据实验的目的不同，其分离、纯

4、化的纯度要求也不同。作为ELISA检测时的抗体，部分情况下饱和硫酸胺纯化即可；最常使用的抗体是经过A蛋白(ProteinA)亲和层析获得的IgG型抗体；免疫放射测定的标记用抗体必须达到双级纯才可应用(亲和层析纯+SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳纯)。纯度要求单克隆抗体在制备过程中经过严格的筛选，因此应根据不同的应用目的选择不同单克隆抗体亚类，如标明供ELISA检测用的单克隆抗体，可能不适合WesternBlot检测。作为初学者尤其应该注意各类单克隆抗体标明的应用范围，而多克隆抗体一般情况下均有较宽的适用范

5、围。适用范围一抗和二抗一级抗体：抗原特异性的抗体二级抗体：抗抗体（针对一抗的Fc段，具有种属特异性）AgAg沉淀反应凝集反应免疫标记技术抗原抗体反应淋巴细胞的检测技术淋巴细胞的分离淋巴细胞的功能测定技术细胞因子的检测技术生物活性检测免疫学检测分子杂交PCR检测免疫学常用的分子生物学技术免疫印迹技术免疫PCR免疫沉淀mAb是由起始于一个B淋巴细胞的单克隆细胞系所分泌的，因此是一种每个抗体分子的结构(包括氨基酸排列顺序和空间构型)都相同的均质性抗体。高度均质性mAb只专一的识别抗原分子上单个抗原位点，

6、因此容易获得特异性抗体，较少产生交叉反应。高度特异性可大量生产，当得到稳定分泌mAb的杂交瘤细胞系后，可置液氮中长期保存，需要时取出复苏，既可在体外培养中收获mAb，也可将杂交瘤细胞接种入同系小鼠腹腔内，然后从荷瘤小鼠的腹水中收获大量mAb。来源稳定