抗体生物制品ppt课件.ppt

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1、4.抗体生物制品抗体的结构、分类与功能多克隆抗体单克隆抗体基因工程抗体EmilvonBehring,1901,antitoxinsGeoregesKohlerandCesarMilstein,1984,monoclonalantibodySusumuTonegama,1987,structureofIggeneGeraldEdelmanandRodneyPorter,1972,structureofantibodyPaulEhrlich,1908,productionofantibodyNobel

2、Prizewinners抗体药物销售趋势图1.抗体的结构、分类与功能抗体是一种蛋白质抗体由四条蛋白质长短链组成(两长两短)抗体分子上有两个抗原结合区(二者相同)抗体与抗原结合是专一性的(lock&key)Epitope,Antigenicdeterminant抗原决定簇一个抗原分子上可能有数个抗原决定簇每个抗原决定簇至少诱生一种专一性抗体蛋白质性抗原决定簇含有六个以上氨基酸整体水平抗体生成技术细胞工程抗体生成技术基因工程抗体生成技术多克隆抗体（抗血清）单克隆抗体嵌合抗体、改形抗体“小型化抗体”（

3、单链抗体）组合抗体库技术噬菌体抗体库技术指由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体混合物。２．多克隆抗体（polyclonalantibody）传统抗血清抗原免疫所有抗体混合123412341234脾脏淋巴結B細胞传统抗血清的交叉反应专一性反应沒有反應交叉反应+-?123AgAxyzAgB1’20AgA’123123123３.单克隆抗体单克隆抗体是将抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而生产的。由于这种抗体是针对一个抗原决定簇的

4、抗体，又是单一的B淋巴细胞克隆产生的，因此称为单克隆抗体。它是结构和特异性完全相同的高纯度抗体。一个B细胞只能产生一种抗体,对付某一抗原决定簇若有许多抗原决定簇,则需许多B细胞分别产生抗体1234mmmm12341234单抗细胞融合取出脾细胞+癌细胞各抗体分开单克隆抗体技术操作流程４.基因工程抗体1人一鼠嵌合抗体(ChimericAntibodies)人一鼠嵌合抗体是将鼠源单抗的可变区与人抗体的恒定区融合而得到的抗体。构建嵌合抗体的大致过程是，将鼠源单抗的可变区基因克隆出来，连到包含有人抗体恒定区

5、基因及表达所需的其它元件(如启动子、增强子、选择标记等)的表达载体上，在哺乳动物细胞(如骨髓瘤细胞、CHO细胞)中表达。构建重组表达载体克隆鼠单抗的可变区基因，可从基因组文库中分离，也可用PCR技术分离。人抗体恒定区可根据需要选择，不同的恒定区会带给嵌合抗体不同功能。为避免人抗体的恒定区产生不需要的副作用，可通过点突变来修饰调整其效应。人一鼠嵌合抗体与鼠单抗相比，免疫原性大大降低，利于在人体内应用，所以目前已制备出上百种抗各种抗原(包括肿瘤相关抗原)的嵌合抗体。Pr鼠VH人CHPr鼠VL人CL免疫

6、球蛋白基因载体的构建H链嵌合载体L链嵌合载体共转染细胞启动子人-鼠嵌合抗体基因工程改造策略鼠VH鼠VL人CL人CH抗体分泌细胞2鼠单抗可变区的人源化尽管嵌合抗体的免疫原性已降低很多，但有时它仍可能引发较强的免疫反应。为了进一步降低抗体的鼠源成分，发展出CDR移植技术。CDR移植即把鼠抗体的CDR序列移植到人抗体的可变区内，所得到的抗体称CDR移植抗体或改型抗体，也就是人源化抗体。经过CDR移植，抗体的免疫原性极低，而其抗原结合能力保持不变，结合半抗原及全抗原(如细胞表面受体、病毒等)的改形抗体都已

7、有报道，到现在已有数百种人源化抗体。（美国正式上市的11种治疗性单抗中多数是改型抗体）CDR序列CDR序列鼠单克隆抗体人抗体人源化抗体（改型抗体）鼠单克隆V区人源化（CDR移植）人源化抗体的构建可用全合成法或定点突变法。全合成法是以人抗体序列为骨架，以鼠抗体的CDR置换人抗体的CDR，将整个可变区序列的两条链分解成若干片段，并使相邻的片段具有彼此互补的粘性末端。合成所有DNA片段，每组片段分别退火，然后逐组连接成完整的可变区基因，插入质粒中，进一步即可用于构建和表达改形抗体。定点突变法是将人的可变

8、区基因克隆，根据鼠抗体的CDR序列合成几种突变引物，用定点突变的方法将人的可变区基因的CDR序列变为鼠抗体的CDR序列，然后表达出改型抗体。研究表明，在构建改形抗体时，简单地进行CDR替换并不能保证抗体具有好的亲和力，因此在构建时还必需包括对影响抗原结合位点的空间结构的框架序列进行操作。小分子抗体包括Fab、Fv或ScFv、单域抗体及最小识别单位等几种。小分子抗体有很多优点:可以用细菌发酵生产，成本低;分子小，穿透力强;不含Fc，没有Fc带来的效应;在体内循环的半衰期短，易清除，利