第四章外植体的接种和培养ppt课件.ppt

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1、第四章外植体的接种和培养第一节外植体的接种第二节培养方法第三节培养条件第四节外植体的褐变及其预防措施第五节试管植物的玻璃化现象及其预防措施1接种室的消毒无菌操作室的地面、墙壁和工作台的灭菌可用2%的新洁尔敏或70%的酒精擦洗，然后用紫外灯照射约20min。使用前用70%酒精喷雾，使空间灰尘落下。一年中要定期一、二次用甲醛和高锰酸钾熏蒸。第一节外植体的接种2外植体的接种接种：是把经过表面消毒后的植物材料切碎或分离出器官、组织、细胞，并将它们转放到无菌培养基上的全部操作过程。D关紫外灯，开日光灯及风机，擦双手及台面E擦拭接种工具并反复灼烧，烘烤培养皿F接种完

2、，清理台面并标识B接种前20min打开紫外灯C接种员洗手，在缓冲间换鞋、穿好实验服A接种前4h接种室灭菌无菌操作第四章外植体的接种和培养第一节外植体的接种第二节培养方法第三节培养条件第四节外植体的褐变及其预防措施第五节试管植物的玻璃化现象及其预防措施第二节培养方法1固体培养优点:简单，应用广泛，一般只要有培养室及接种箱即可开展工作。缺点:外植体或愈伤组织只有底部表面接触培养基，吸收养分，造成各部分营养浓度差异，影响生长。外植体插入培养基后，气体交换不畅及排泄物质积累，影响组织吸收和造成毒害。受光不均匀，生长不一致。2．液体培养分静止培养和振荡培养：2.1

3、静止液体培养优点：培养基中不出现营养物浓度差异的现象，可以用来进行许多营养方面的研究工作。静止培养不需增添专门设备，适合于某些原生质体培养；2.2振荡液体培养(1)连续浸没搅动或振动培养液使组织悬浮于培养基中。培养液的体积约占容器体积的20％，以确保最大的气相表面，造成较好的通气条件。大多培养采用摇床：往复式摇床和旋转式摇床都可用，但以用后者为多。振动速度一般是50-100转／分。(2)定期浸没组织块时而在液体中时而在气体里，这样既可保证培养基的充分混和，又保证了组织块呼吸所需的气体交换。转床第四章外植体的接种和培养第一节外植体的接种第二节培养方法第三

4、节培养条件第四节外植体的褐变及其预防措施第五节试管植物的玻璃化现象及其预防措施第三节外植体的培养条件培养条件包括：光照、温度、湿度、氧气和培养基的pH值等。1）25±2ºC。2）植株种类及外植体的不同，其最适温度也是不同的。如百合20℃；月季25-27℃；番茄28℃。低于15C或高于35C，对生长都是不利的。△1温度2光照1）光强★影响外植体细胞的增殖、组织和器官的分化。★有的材料愈伤组织的诱导需光或需暗；★普通培养室要求光照强度1000lx-5000lx。★光照强，幼苗生长健壮；光照弱，幼苗生长弱小，容易徒长。★不同波长的光对细胞的分裂和器官的分化

5、有影响。2）光质②白光促进小花天竺葵愈伤组织的生长，蓝光则无作用。如：①红光促进杨树愈伤组织的生长，蓝光阻碍其生长。3）光照时间根据植物生物学特性决定；每日光照12h-16h，1)pH值5-6.5，一般为5.8，调整用1M的NaOH和HCl溶液。3pH值2)pH影响培养基的硬度。pH＞6.0培养基会变硬；pH＜5.0培养基不易凝固。3)灭菌之前，培养基的pH要比标准提高0.2－0.3个单位。4湿度1）瓶内的湿度：主要受到培养基含水量和封口膜透性的影响。如培养基过硬，则不利于外植体接触和插入培养基，导致生长迟缓；封口膜过于透气，也会使瓶内湿度下降。2）环境

6、湿度：过低会使培养基丧失大量水分，渗透势升高，影响材料对营养物质的吸收，也会阻碍外植体的生长。一般为70－80%。5气体(必要条件)1）培养瓶内氧气的充足与否与封口材料有关。可用棉塞或特制的封口塑料。通气最好的是棉塞，但棉塞易使培养基干燥，夏季易引起污染。2）培养基内氧气充足与否与培养基的种类和培养方式有关。◆固体培养基可加进活性炭来增加通气度,以利于发根。◆液体培养时，采取振荡培养，增加通气性。第四章外植体的接种和培养第一节外植体的接种第二节培养方法第三节培养条件第四节外植体的褐变及其预防措施第五节试管植物的玻璃化现象及其预防措施第四节外植体的褐变及

7、其防止褐变：是指外植体在培养过程，自身组织从表面向培养基释放出褐色物质，以致培养基逐渐变成褐色，外植体也随之进一步变褐而死亡的现象。1褐变的原因2影响褐变的因素3褐变的预防措施1褐变的原因褐变的发生与外植体组织中所含的酚类化合物和多酚氧化酶有关。通常酚类化合物和多酚氧化酶分隔存在，比较稳定。当切割外植体后，切口附近的分隔作用破坏，酚类与多酚氧酶接触，在多酚氧化酶的催化下酚类迅速氧化成褐色的醌类物质和水，醌类又会在酪氨酸酶等的作用下，与外植体组织中的蛋白质发生聚合，进一步引起其他酶系统失活，从而导致组织代谢紊乱，生长停滞，最终衰老死亡。2影响褐变的因素2.

8、1．植物材料2.2．培养条件2.3．培养基2.4．材料转瓶周期2.1植物材料（1