微生物课件：3病毒感染的检查方法与防治原则.ppt

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1、病毒感染的检查方法与防治原则温州医科大学微免教研室陈俊病毒感染的实验室诊断病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体病毒颗粒病毒抗原病毒核酸病毒酶类：如逆转录酶电镜直接观察光镜检查包涵体分离培养一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意：1.标本用“双抗”或两性霉素B处理2.低温保存，尽快送检3.血清学诊断采双份血清二、形态学检查光学显微镜检查荧光显微镜检查透射电子显微镜检查三、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养细胞培养（cellculture）鸡胚接种（egginoculation）动物接种（anima

2、linoculation）1.鸡胚培养采用孵化9～14天的鸡胚绒毛尿囊膜痘苗病毒、人类疱疹病毒尿囊腔接种部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔流感病毒的初次分离卵黄囊嗜神经病毒1、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂2.动物接种应用：尚无敏感细胞的病毒培养动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：有饲养条件要求，费用高，动物体内常带有潜伏病毒3.细胞培养单层细胞培养（monolayercellculture）分类悬浮细胞培养（suspendedcellculture）原代细

3、胞（primarycell）细胞种类二倍体细胞（diploidcell）传代细胞系（continuouscellline）病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞1．病毒增殖鉴定(1)细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE）①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。（二）病毒在培养细胞内增殖的检查与鉴定①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞

4、②形成多核巨细胞或称融合细胞(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)③形成包涵体(inclusionbody)(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)腮腺炎病毒感染细胞(2)红细胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋红细胞表面HA受体(3)干扰现象（interference）风疹病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE(－)埃可病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚肾细胞风疹病毒？埃可病毒CPE(-)—风疹病毒(+)埃可病毒(-)CPE(+)—

5、风疹病毒(-)埃可病毒(+)(4)细胞代谢改变细胞代谢变慢pH变化减慢四、病毒抗原的检测免疫荧光法放射免疫测定法酶联免疫吸附试验五、病毒核酸检测抗原变异病毒基因的鉴定核酸扩增核酸杂交基因芯片基因测序六、血清学诊断补体结合试验血凝抑制试验ELISA病毒感染的防治原则灭活疫苗（inactivatedvaccine）活疫苗（livingvaccine）重组载体疫苗（recombinantcarriervaccine）亚单位疫苗（subunitvaccine）化学提取或人工合成疫苗重组疫苗（recombinantvac

6、cine）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）一、人工主动免疫二、人工被动免疫免疫球蛋白血清丙种球蛋白细胞免疫制剂IFN-α、β、γ细胞因子IL-2、IL-6、IL-12TNF、CSF淋巴因子激活的杀伤细胞——LAK细胞病毒感染的药物治疗核苷类药物非核苷类反转录酶抑制剂蛋白酶抑制剂2.干扰素和干扰素诱生剂3.中草药4.基因治疗剂5.治疗性疫苗1.抗病毒化学制剂反义寡核苷酸干扰RNA核酶（ribozyme）核苷类药物作用机制HSV/VZV无环鸟苷（NA）病毒胸苷激酶NA一磷酸宿主细胞激酶NA三磷酸（缺

7、乏糖环3’-OH基）病毒DNA聚合酶核酸链延伸被迫终止