章病毒感染的检查方法与防治原则.ppt

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1、病毒的检测生物学检测免疫学检测核酸的检测第一节病毒感染的检查方法标本的采集与送检1.标本中常加入抗生素。2.低温保存，尽快送检。3.血清学标本：两份二、病毒的分离与鉴定标本分离培养动物接种鸡胚培养细胞培养病毒形态观察光镜电镜包涵体病毒体CPETCID50,PFU（一）病毒的分离培养1.动物接种应用：尚无敏感细胞的病毒培养动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：有饲养条件要求，费用高，动物体内常带有潜伏病毒动物接种2.鸡胚培养采用孵化9-14天的鸡胚绒毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人类疱疹病毒

2、尿囊腔（allantoiccavity）接种部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分离卵黄囊（yolksac）嗜神经病毒优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂3.细胞培养单层细胞培养（monolayercellculture）悬浮细胞培养（suspendedcellculture）原代细胞（primarycell）细胞种类二倍体细胞（diploidcell）传代细胞系（continuouscellline）病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞病毒增殖的指征1.细胞病变效应(cytopat

3、hiceffect,CPE)①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成包涵体(inclusionbody)腮腺炎病毒感染细胞2.红细胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋红细胞表面HA受体3.干扰现象（interference）4.细胞代谢改变细胞代谢变慢pH变化减慢（二）病毒的鉴定病毒形态学鉴定病毒血清学鉴定病

4、毒分子生物学鉴定（三）病毒数量与感染性测定1.血凝试验：病毒总量（活病毒＋死病毒）2.空斑形成试验（plaqueformationtest）3.50％组织细胞感染量（50％tissuecultureinfectiousdose,TCID50）感染性病毒量空斑试验三、病毒感染的血清学诊断应用：①采取标本分离病毒为时已晚②目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒③为证实所分离的病毒的临床意义④进行血清流行病学调查等1.中和试验（neutralizingtest）病毒＋中和抗体病毒失去感染性特点：特异性高，抗体维持时间长应用：人群免疫情况的

5、调查临床诊断少用2.血凝抑制试验（hemagglutinationinhibitiontest）—正粘病毒型与亚型鉴定病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集（血凝抑制试验）3.补体结合试验（complementfixationtest）用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体特点：特异性低，抗体出现早，消失快应用：近期感染指标。四、病毒感染的快速诊断数小时内出结果病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗体检测（IgM）（一）形态学检查电镜和免疫电镜检查普通光学显微镜检查包涵体（二）病毒成分检测1.病

6、毒蛋白抗原检测免疫标记技术2.病毒核酸检测核酸扩增技术核酸杂交技术基因芯片技术基因测序（三）早期抗体检测可诊断急性感染特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒EBV早期抗原抗体第二节病毒感染的特异性预防人工主动免疫(artificialactiveimmunization):将疫苗(vaccine)或类毒素(toxoid)接种于人体，使机体主动产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施。主要用于预防疫苗第一代疫苗第二代疫苗第三代疫苗死疫苗活疫苗亚单位疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗合成肽疫苗DNA疫苗转基因植物疫苗*载体疫苗利用非致病微生物做载

7、体，将病毒的保护性抗原基因片段重组到载体微生物基因组中，用表达保护性抗原的微生物作为疫苗。载体疫苗是活疫苗，具有和减毒活疫苗相似的特点。*亚单位疫苗用化学方法裂解和提取而制成的病毒保护性抗原组份。其特点与灭活疫苗类似。基因工程亚单位疫苗*用基因工程表达的病毒蛋白抗原制成的疫苗。*表达外源基因的系统----细菌、酵母、哺乳动物细胞、昆虫细胞等。*基因工程亚单位疫苗的安全性好，但免疫原性较差，需使用佐剂以提高其免疫原性。*核酸疫苗@将编码病毒某种抗原蛋白的外源基因，即抗原的cDNA或mRNA与载体（如质粒DNA）重组直接注入体内，使体细胞

8、编码病毒抗原，并通过细胞MHC分子结合递呈后，在辅助因子的协助下诱导细胞免疫和抗体应答。@DNA疫苗；RNA疫苗。人工被动免疫(artificialpassiveimmunization)输入含有特异性抗体的免疫血清、纯