病毒感染的检查方法与防治原则

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1、病毒感染的检查方法与防治原则南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系张其威PhDEmail：zhang.qiwei@yahoo.comQQ:3910035第25章1病原学诊断的意义有助于临床治疗（抗生素、干扰素等）为控制病毒学疾病的流行提供实验依据（疫苗等）2第一节病毒感染的检查3病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体病毒颗粒病毒抗原（如血凝素）病毒核酸（PCR）病毒酶类：如逆转录酶电镜直接观察光镜检查包涵体分离培养（如IgM、IgG）4一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意：1.标本用“双抗”（2000-

2、10000U）或两性霉素B（2ug/ml)处理2.低温保存，尽快送检（冰块，CO2）3.血清学诊断采双份血清（发病初，2-3周）5二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养细胞培养（cellculture）鸡胚接种（egginoculation）动物接种（animalinoculation）6二、病毒的分离与鉴定一般程序：标本无菌处理动物接种鸡胚培养细胞培养指标阳性指标阴性病毒鉴定盲传2～3代指标阴性病毒阴性7（一）病毒的分离培养1.细胞培养（简述）单层细胞培养（monolayercellculture）分类悬浮细胞培养（suspe

3、ndedcellculture）原代细胞（primarycell）细胞种类二倍体细胞（diploidcell）传代细胞系（continuouscellline）8病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞91.细胞培养(1)原代和次代细胞培养组织组织块分散的单个细胞单层细胞剪碎培养基(原代细胞)单层细胞(次代细胞)传代培养蛋白酶10特点：①对多种病毒敏感②生长能力有限（20代）,获取成本高③可携带潜伏病毒（EB）1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养11(2)二倍体细胞培养体外分裂50～100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产

4、。特点：①对多种病毒敏感②不带异种蛋白(人源性)③不带病毒，无致瘤潜能④可传50-100代左右1.细胞培养12(3)传代细胞培养特点：①对多种病毒敏感性高②繁殖能力高，传代时间长③有致癌危险，不能用于疫苗生产（由肿瘤细胞或二倍体细胞突变而来）1.细胞培养132.鸡胚培养采用孵化9～14天的鸡胚绒毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人类疱疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接种部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分离卵黄囊（yolksac）嗜神经病毒14尿囊腔152、鸡

5、胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂1617183.动物接种应用：尚无敏感细胞的病毒培养（HCV等）动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：有饲养条件要求，费用高，动物体内常带有潜伏病毒，安全性要求高191．病毒增殖鉴定(1)细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE）①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。（二）病毒的鉴定2021①细胞变圆

6、、聚集、坏死、溶解或脱落(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)22麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞②形成多核巨细胞或称融合细胞(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)23③形成包涵体(inclusionbody)(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)24腮腺炎病毒感染细胞(2)红细胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋红细胞表面HA受体25(3)干扰现象（interference）风疹病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE(－)埃可病毒

7、＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚肾细胞风疹病毒？埃可病毒（+）CPE(-)—风疹病毒(+)埃可病毒(-)CPE(+)—风疹病毒(-)埃可病毒(+)26(4)细胞代谢改变细胞代谢变慢pH改变（adenovirus）272.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），对一般病毒检测意义不大283.病毒血清学鉴定鉴定病毒种、型、亚型(1)血凝抑制试验（hemagglutinationinhibitiontest）—正粘病毒型与亚型鉴定病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验/血凝效价）病毒＋特异性

8、抗体＋鸡红细胞＝不凝集（血凝抑制试验）2930(2)免疫标记法（FIA、EIA/ELISA、RIA）——多种病毒鉴定(3)凝胶免疫扩散试验(gelimmuno-diffusiontest)——多种病毒鉴定3.病毒血清学鉴定314.病毒分子生物学鉴定