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时间:2020-09-18
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1、动物细胞工程单克隆抗体等动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合动物细胞工程常用的技术单克隆抗体等动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合是其他动物细胞工程技术的基础。动物细胞工程常用的技术2.2.1动物细胞培养和核移植技术1.动物细胞培养2.2.1动物细胞培养和核移植技术1.动物细胞培养从动物机体中取出相关组织,将它们分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。1.1概念1.2动物细胞培养过程1.2动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官1.2动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官比老龄动物的组织细胞增殖能力强,
2、有丝分裂旺盛。分化程度越低,繁殖能力越强,越容易培养。1.2动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官剪碎胰蛋白酶1.2动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官剪碎胰蛋白酶动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。1.2动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官剪碎胰蛋白酶动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4,此环境下胃蛋白酶(1.5)没有活性,而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。1.2动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液剪碎胰蛋白酶细胞贴壁过程1.2动物细胞培
3、养过程胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液剪碎胰蛋白酶原代培养贴壁生长接触抑制3.有关概念:原代培养:从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。1.2动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液剪碎胰蛋白酶原代培养贴壁生长接触抑制原代细胞1.2动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液剪碎胰蛋白酶原代培养贴壁生长接触抑制传代培养洗涤、稀释、分离原代细胞原代培养:从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。传代培养:将原代细胞从培养瓶中取出,配制成细胞悬浮液,分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养,称为传代培养。3.有关概念:1.2动物
4、细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液剪碎胰蛋白酶原代培养贴壁生长接触抑制传代培养洗涤、稀释、分离原代细胞传代细胞1.2动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液剪碎胰蛋白酶原代培养贴壁生长接触抑制传代培养洗涤、稀释、分离原代细胞传代细胞10代以内,保持正常二倍体核型1.2动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液剪碎胰蛋白酶原代培养贴壁生长接触抑制传代培养洗涤、稀释、分离细胞增殖缓慢,核型可能变化原代细胞传代细胞1.2动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液剪碎胰蛋白酶原代培养贴壁生长接触抑制传代培养洗
5、涤、稀释、分离动物细胞培养不能最终培养成生物体原代细胞传代细胞原代培养和传代培养细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养多数组织细胞固定在表面生长和分裂随细胞增多,细胞就会停止分裂增殖讨论多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中,根据你所学的内环境的知识,思考以下问题:1.体外培养细胞时需要提供哪些物质?2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件?多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中,根据你所学的内环境的知识,思考以下问题:1.体外培养细胞时需要提供哪些物质?2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件?葡萄糖、氨基酸、无机盐
6、、促生长因子、微量元素等。讨论多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中,根据你所学的内环境的知识,思考以下问题:1.体外培养细胞时需要提供哪些物质?2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件?葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。适宜温度、PH和气体环境;无菌无毒环境讨论1.3动物细胞培养的条件1.3动物细胞培养的条件1.无菌、无毒的环境2.必须的营养物质(葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、激素、促生长因子、动物血清等。)3.适宜的温度:36.5±0.5度4.充足的氧气和适宜的酸碱度:O2和CO2(95%空气和5%CO2)思考:
7、为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清?思考:为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清?血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等。有些氨基酸(必需氨基酸)动物细胞本身不能合成必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子。血清中还含有多种未知的活性物质,能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此,细胞培养时,要保证细胞能够顺利生长和增殖,一般须添加10%~20%的血清。植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理培养基性质培养基特有成分培养结果培养目的植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目植物组织
8、培养动物细胞培养原理细胞的全能性细胞增殖培养基性质培养基特有成分培养结果培养目的植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细胞的全能性细胞增殖培养基性质固体培养基液体培养基培养基特有成分培养结果培养目的植物组织培养和动物细
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