生理实验课件：蛙心灌流.ppt

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1、蛙心灌流【实验原理】心脏的自动节律性活动，需要有一个合适的理化环境。蟾蜍心脏离体后，用任氏液灌流，心脏在一定时间内可保持节律性收缩与舒张。改变灌流液的成分，心脏跳动的频率和幅度会随之发生改变。一、复习理论知识心肌细胞(myocardialcell)：工作细胞(workingcardiaccell)：心房肌和心室肌收缩性，兴奋性，传导性，无自律性。自律细胞：(特殊传导系统)：窦房结P细胞(pacemakercell)浦肯野细胞(Purkinjecell)有兴奋性、传导性，自律性，收缩功能基本丧失(一)心室肌的静息电位和动作电位1.静息电位(restingpote

2、ntial)：-90mv其形成机制与骨骼肌和神经纤维相似。2.动作电位(actionpotential)：(1)除极过程：0期(phase0)：电压门控式Na+通道开放达到阈电位Na+通道大量开放去极化(2)复极化过程：1，2，3期(200300ms)•Phase1(快速复极初期)：快Na+通道关闭，瞬时性外向K+通道激活(Ito)K+快速外流跨膜电位：+20~+30mv0mv•Phase2(平台期)：Ca2+内流和Na+内流(少量)，K+外流互相平衡状态跨膜电位：0mv等电位(心室肌主要特征)•Phase3(快速复极末期)：L型钙通道失活K+外流增加

3、所致(3)静息期：(Phase4)：恢复期。-90mV，活跃的离子转运（二）自律细胞的跨膜电位及机制1.窦房结细胞的动作电位及其形成机制：0期：最大复极电位为-60~-65mv，净内向电流起自动除极阈电位(-40mv)，达到-40mv时L型Ca++通道激活钙内流。钙通道是慢钙通道。窦房结细胞是慢反应自律细胞。受细胞外Ca++浓度的影响0期后直接进入3期复极化过程3期：Ik通道开放，K+外流增加，导致3期复极。4期：机制复杂，净内向离子电流引起4期自动去极化(If,Ica-T)。用离体蛙心灌流的方法观察：①Na+、K+、Ca2+②酸、碱度③E、Ach对心脏活

4、动的影响【实验目的】【实验对象】生物机能实验系统张力换能器、蛙心夹蛙心插管、试管夹缝合线、双凹夹万能支台蛙类手术器械滴管两只【实验器材和药品】任氏液0.65％NaCll％KCl3％CaC12l：10,000El：10,000ACh3％乳酸2.5％NaHCO3【实验步骤】一、离体蟾蜍心脏制备1.取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓。2.打开胸腔，暴露心脏。【实验步骤】一、离体蟾蜍心脏制备1.取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓2.打开胸腔，暴露心脏。（腹面）（背面）【实验步骤】一、离体蟾蜍心脏制备3.蛙心插管♦在主A干下穿一线打一松结；在左主A下再穿一线结扎。♦在A圆锥、左主A根部剪口

5、，将蛙心插管插入心室内。插管插入心室标志见血液涌入插管内，并随心跳上下波动。【实验步骤】一、离体蟾蜍心脏的制备4.将松结线扎紧，并固定在插管的侧管上。5.摘出心脏任氏液冲洗数次（避免损伤静脉窦）【实验步骤】一、离体蟾蜍心脏的制备二、连接实验装置换能器1.用试管夹将蛙心插管固定在万能支台上2.把张力换能器固定在万能支台上，在心室舒张期将与换能器相连的蛙心夹夹在心尖上。*换能器的连线应与插管中轴在同一直线上，即与地面垂直四、观察项目调整增益、走纸速度，使蛙心收缩曲线至最好观察形态。（一）描记正常心搏曲线曲线幅度——收缩的强弱曲线疏密——心率曲线规律性——心跳的节律

6、性曲线基线——舒张的程度顺序观察项目药量心肌(率、力)变化12345678任氏液灌流0.65%NaCl灌流3%CaCl21～2滴1～2滴1%KCl1:10000E1:10000Ach3%乳酸2.5%NaHCO31滴1滴2～4滴1～2滴（二）离子和药物的影响*【注意事项】♦当每种化学药物作用已明显时，应立即将蛙心插管内液体吸出而换上任氏液数次，以免心肌受损。♦须待心跳恢复正常后，才能进行下一实验项目。♦每次换液时，蛙心插管内液面应保持相同高度。♦吸管使用要分开，不可混淆。顺序观察项目药量心肌(率、力)变化12345678任氏液灌流0.65%NaCl灌流3%CaC

7、l21～2滴1～2滴1%KCl1:10000E1:10000Ach3%乳酸2.5%NaHCO31滴1滴2～4滴正常力↓力↑，舒张不完全力↓力↓力↑，心率↑力↓，心率↓1～2滴恢复正常【实验结果】【实验结果】【结果分析】任氏液：正常对照2.0.65%NaCl灌流0.65%NaCl灌流→Ca2+内流↓兴奋-收缩耦联↓收缩力↓[Ca2+]i↓【结果分析】任氏液：正常对照3.3%CaCl2（1～2滴）Ca2+内流↑兴奋-收缩耦联↑收缩力↑[Ca2+]i↑[Ca2+]o↑*舒张期Ca2+与肌钙蛋白不完全解离，产生Ca2+强直，基线上移。【结果分析】任氏液：正常对照4.1

8、%KCl（1滴）AP平台期缩短Ca2+