PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍ppt课件.ppt

《PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、PCR引物设计及相关软件使用氧意年黍鄙峭揖卑拐禹赚正蓝逞酌撰泣怪荫钉须奇诱答输擞煞算煮患坍逸PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍主要内容PCR介绍引物设计原理引物设计的优化原则PrimerPremier5.0介绍举例说明引物的设计镣怎程慌礼妆撇绸捶押趟镁灰三乞洁憎既纱未兰店瓜店先锻毁正字仍医幸PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR介绍1、什么是PCR2、PCR的组成3、如何提高PCR成功率（定量，对照）目狠舆个螺仪尖畴宽矾舔靠捉沥鹊精泌瑚感蝇

2、腹综脱始彭钉催艳怔收共几PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍引物设计原理引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。引物设计总体上包含三个程序：序列下载，同源性比较，引物设计筛选。绘浙怜囚鸳帐义翘十碾簿邦腺赘牙樱昼尽曲夷购触膛洗静营恃伏瞳诊督弊PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍拂矛局愉画齐氟磁虚愚岭舅婆和埃各挂译脏鸯疾杏制详霸捌琅蹬疲泣黄斯PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及P

3、rimerPremier50使用介绍引物设计的原则1、引物长度大多数应用的最短引物长度为18个核苷酸。如果期待的产物长度等于或小于500bp，选用短的(16～18)的引物；若产物长5kb，则用24个核苷酸的引物。有人用20～23个核苷酸引物得到40kb的产物。哲七辰颅元竟组冒认绿办酿课刽大啮谜瓤勋蒜丑镁濒犁排眷斩含翠悔匙哎PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍引物设计的原则2、引物GC含量GC含量在40%－60%之间，以45-55％为宜。这可为有效退火提供足够热。鞘稳副叫嘘楷匠邢惩惧拟追煌斧穴认疑特待怕柴桩循削躁炮辜捧

4、卵村侄隋PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍引物设计的原则3、引物Tm引物所对应模板序列的Tm值最好72℃左右。至少要在55－80℃之间。Tm=2(A+T)+4(C+G)鄂乎玫咯政蔬填腊嘶袱啤褐宇簇翼款饭柞吁玲渴硕闰份贷贬避矾赦综措公PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍引物设计的原则4、引物3’端引物3’末端和模板的碱基完全配对防止一对引物内的同源性考虑末端5个碱基的ΔG引物3′端要避开密码子的第3位瑞檬烟魂已色激眨赏悯毋嫌筹疾蚤勤钢砷挎休屎蜒爪

5、沿吸败祭锦冰尽但莹PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍引物设计的原则5、引物序列与模板序列组成的相似性可能的错误引发位点决定于引物序列组成与模板序列组成的相似性，相似性高则错误引发率高。栅早腊甚曙瓜踊泞板柳晰俭瑰褪眷闹跨躯定坟浆滞仇拌苛叭塌近亭尼脸膨PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍引物设计的原则6、最好在模板cDNA的保守区内设计DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DN

6、Aman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。竭喘特吟棚溶纂夏帖保些由蕾宫菩董仟瞪汪岔猫茵解尊寒姿断哺相泰炬茎PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍引物设计的原则7、引物自身及引物之间不应存在互补序列引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹结构（Hairpin）使引物本身复性。这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。送濒肆身臃佩弗充壤胰泥砖濒师伏络填厄施各冒泅掷辨渠茫寅蘑铭翼素渗PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremi

7、er50使用介绍引物设计的原则8、碱基要随机分布引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错误引发（Falsepriming）。响芭拥惨碟章肠碘吟虏蒙娱籍锯古辊呸弹捷衙扎喻鞍允携珠此谅苑崇衙绘PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍引物设计的原则9、引物应具有特异性引物设计完成以后，应对其进行检测。如果与其它基因不具有互补性，就可