【人教版】高中生物选修一课件：2.1 微生物的实验室培养(人教版选修1).ppt

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1、实验二微生物的实验室培养营养条件----培养基人们按照微生物对营养物质的不同要求,配制出供其生长繁殖的营养基质.培养基种类培养基的成分水碳源氮源无机盐生长因子其他条件配制培养基时还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质（生长因子）以及氧气的需求。环境条件-----无菌技术----消毒煮沸消毒法、巴氏消毒法。化学试剂消毒法：用酒精擦拭双手、氯气消毒水源等。紫外线消毒法：紫外线照射接种室、接种箱或超净工作台。无菌技术----灼烧灭菌将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属器具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底灭菌。接种过程中，试管口或瓶口

2、等容易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌。无菌技术----干热灭菌将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在160～170℃加热1～2小时可达到灭菌目的。能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属器具等。无菌技术----高压蒸汽灭菌将灭菌物品放置高压蒸汽灭菌锅中，一般保持压力为100KPa、温度121℃条件下，维持15～30分钟。思考---选择合适方法消毒或灭菌培养基和培养皿玻棒、试管、烧瓶、吸管实验者的双手环境条件-----培养温度和时间种类条件温度天数细菌30～37度1～2d放线菌25～28度5～7d真菌25～28度3～4d纯化技术-

3、-----菌落菌落：微生物在固体培养基表面生长可形成菌落。单菌落：一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。获得单菌落就达到了纯化培养微生物的目的。实验药品及器材大肠杆菌菌液、液体培养基、固体培养基、酒精灯、70%酒精棉、高压灭菌锅、涂布器、接种环、恒温培养箱等。配制培养基----液体培养基计算称量溶化（不加琼脂）调pH灭菌配制培养基----固体培养基计算称量溶化（添加琼脂）调pH灭菌倒平板（50℃）纯化大肠杆菌----平板划线法平板划线法是通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以得到单菌落

4、。纯化大肠杆菌----稀释涂布法稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基上进行培养。合适的稀释度菌液涂布后可在固体培养基上形成单菌落。注意：取出涂布器时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器再灼烧灭菌。培养将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱中,培养12小时和24小时后,分别观察并记录结果。实验四微生物数量的测定统计菌落数目估算样品中的活菌数量当稀释度足够高时，平板上的一个菌落来源于菌液中的一个活菌。在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养以保证获得菌落数在30

5、～300之间、适于计数的平板。合适的稀释度测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养实验方法稀释涂布法实验步骤土壤取样。配制一系列梯度稀释土壤溶液涂布在固体培养基上，按照不同微生物培养温度和时间进行培养。统计菌落：每个梯度应多涂几个平板，取其平均值。并设置空白对照。估算每克样品中的菌株数：统计结果常常用菌落数目。所测得的菌落数目一般小于实际菌液中的活菌数。显微镜直接计数法：血球计数板法统计结果：一般用活菌数表示。滤膜法：测定饮用水中大肠杆菌的数目已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红—美蓝培养基上培养。在该培养基上大肠杆菌的

6、菌落呈黑色。可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。