ELISA法检测抗―HIV实验中灰区设置的探讨.doc

《ELISA法检测抗―HIV实验中灰区设置的探讨.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、ELISA法检测抗一HIV实验中灰区设置的探讨摘要：目的通过I口I顾性分析，对ELISA法检测抗TIIV结果判断时灰区设置的必要性进行探讨。方法对本站近7年ELTSA法检测抗-HTV资料进行分析。结果分析发现，灰区的设置增加了假阳性的标本数，经经确证试验为HIV感染的标本均不是灰区范围内的标本。结论ELISA法检测抗-HIV时应严格按试剂说明书判断阴、阳性，无需另设置灰区。关键词：ELTSA法检测；HTV；灰区设置人类免疫缺陷病毒（HIV）感染标志物的检测是采供机构对献血标本进行血液筛查的法定项目之一，通过筛查把合格的血液

2、用于临床是阻断经血转播HIV的重要手段。ELISA方法检测HIV感染标志物则是采供血机构检测抗TIIV的重要方法。在用ELISA方法测定IIIV抗体时，是根据临界值（Cut-Off值）来判断是否有反应性，并决定相应的血液是否能用于临床。在计算临界值时，常设置灰区，希望以此提高试剂的敏感度，淘汰处在弱阳性甚至〃窗口期〃的标本，而灰区设置的范围并没有统一的设置标准，各实验室自行设置。那么设置灰区是否能提高对抗-HIV检测的敏感度？我们对此进行了探讨。笔者对本站从2007年〜2013年2月抗TIIV检测结果进行统计分析，结果报告

3、如下：1资料与方法1.1一般资料本站2007年〜2013年2月本单位无偿献血标本115766份。1.2试剂与仪器抗-HTV检测试剂分别使用了厦门新创、珠海珠和法国伯乐生产的试剂盒，所有试剂均批批检合格。所用仪器有瑞士Tecan公司加祥仪和德国BEPIII,sunrise酶标仪等。1.3标本试验结果的计算和判定按试剂说明书计算临界值（CO）,初、复检及重复试验吸光度值（0D）大于C0X80%的均判定为有反应性，即S/CO值在0.8〜1.0之间的标本设置为灰区的标本。在初检和复检过程中所有有反应性的标本送本市疾病控制中心，采用

4、蛋白免疫印迹实验（WB法）进行确证。最后阳性及不确定的结果以疾病控制中心（CDC）确证实验为准。2结果阴、阳性及灰区的标本分布：在115766标本中，筛查为阴性的标本115766份，阳性及灰区的标本820份。820份中在灰区的标本为78份，占9.5%。将这些标本送本市CDC进行确证，见表lo3讨论HTV是1种可经输血传播的严重的传染病，采供血机构对无偿献血的血液标本进行抗-HIV筛查，是阻断HIV传播的重要手段。灰区设置就是将临界值（C0值）下调一定的值，在这个范围内的标本进行重复检测，如果仍在灰区即报阳性。设置的范围一般

5、有两种，一种是根据室内质控的CV,一般在15-20%之间，另一种是根据室内质控的标准差。本站是将临界值（C0）与C0X80%范围的0D值设为灰区范围,即S/CO值在0.8-1.0之间的标本设置为灰区的标本。笔者对近6年的抗TIIV筛查进行

6、口

7、顾性分析，发现在有反应性的标本中，经确证实验（WB法）确证为抗-HIV阳性的标本，在ELISA方法检测时S/CO值明显增高，而且两种试剂均有反应性，S/CO的值均大于7以上。S/CO值在1.0-5.4之间的标本，经本市CDC确证，均为阴性或不确定，其中不确定的20份,其余均为阴性。在

8、灰区范围的标本，即S/CO值在0.8〜1.0之间的标本，有2份为不确定，其余均为阴性。对结果为不确定的献血者经电话跟踪随访6个月以上，无1例阳性，说明并不是真正的HIV感染者。可以说在灰区范围内的标本均是假阳性。在有反应性的标本中，最后确证为阳性的标本与阴性的标本有明显的界限，灰区范围内的标本均是假阳性，因此，笔者认为，设置灰区没有实际意义，没有必需设置。ELTSA方法受到很多因素的影响，有试剂、标本、设备、人员操作及环境等因素。假阳性和假阴性都有可能，其中试剂的敏感度在血液筛查中无疑是最关键的因素［1］。如果试剂的敏感度

9、不够，不论是否设置灰区，都存在漏检的可能。反之，如果选择了高敏感度的试剂，由于ELISA方法检测的是抗体，虽然第四代试剂也能同时检测抗原，但方法学决定了〃窗口期〃是不可避免的，这是由ELISA方法学的本身的局限性决定的，因此存在漏检的可能，但企图通过设置灰区来防止漏检显然是不现实的，在抗-HIV筛查实验中灰区的设置并不象抗TICV检测和乙肝表面抗原检测中能起到防止漏检的作用［2］。《血站技术操作规程》2012版中4.8.3规定，判定试验有效后，按照试剂说明书的要求计算临界值和灰区，根据标本检测值与临界值的比较结果，判定为标

10、本检测结论为无反应性、有反应性或不确定。同时《全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）》也没有提到灰区设置的概念。因此建议规范灰区设定范围，严格按试剂说明书设置，而不是各试验室各自凭经验设置，试剂说明书中如果没有要求设置灰区，建议不要人为设置灰区。同时建立质量体系，提高检测的精密度，并在此基础上，提高