临床标本的采集、验收、保存及核酸的提取ppt课件.ppt

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1、临床标本的采集、验收、保存及核酸的提取前言：标本的采集，验收及保存是实验开始的第一步，也是实验能否成功的关键之一。因此有必要对标本的采集，验收及保存进行规定，临床实验室并将此项规定明示予相关科室（如抽血处。病区等）并积极与他们沟通交流以确保此项规定的准确无误的实施。一、标本采集，验收的总原则1规定标本采集的时间2标本的类型和采集量3标本采集部位的准备4标本采集中的防污染措施5标本的唯一标识6标本的拒收规定1、规定标本采集的时间此项规定一方面应便于病人与检验人员做好准备，集中收集标本及时检测，尤其是RNA标本应在采集后及时处理以防RNA的降解。另一方面应考虑疾病发

2、展过程中，标本采集过早过晚都可能给出假阴性结果。比如，获得性梅毒分三期Ⅰ期（初期）梅毒：外生殖器溃疡渗出物中有大量的TP；Ⅱ期（中期）在梅毒疹与淋巴结中存在大量的TP；Ⅲ期（晚期）病变波及全身组织器官，病损处TP少。2、标本的类型和采集量标本的类型和采集量应根据所检测的病原体而定并且重视和考虑同一病原体感染部位不同所采集的标本类型亦不同：比如：肺部结核应取深部晨痰；神经系统结核应取脑脊液；泌尿系统结核应取尿液（清晨一次全部尿量或24小时尿沉渣）；胸腔腹腔结核可取胸水，腹水；另外对于病变部位不明的病人亦可取抗凝血。标本采集部位的清洁消毒可去掉污染的微生物或其它杂物,但应

3、适度,过度清洁消毒有可能会去掉或破坏靶微生物,故标本采集部位的准备应由训练有素的人员进行。3标本采集部位的准备4、标本采集中的防污染措施（1）标本采集采用一次性材料。（2）标本应装在封闭的无菌一次性容器中。（3）标本应收集在专用的容器内，而不能与其他检测项目共用同一份标本，因为这样做大大增加了标本间污染的可能若是进行RNA检测的标本易受RNase污染。5、标本的唯一标识比如：HBV2003101001TB20031010015、标本的拒收范围（1）经查对标本的病人姓名，年龄，性别及检测号不符者。（2）采集的标本将严重影响检测结果（如检测肺结核的标本是唾液而不是晨痰）

4、。（3）血量不足，未正确使用抗凝剂。（4）严重溶血，脂血，黄疸病人应尽可能要求病人重取如不行应在验单标本性状栏中如实填写：溶血，脂血，黄疸以明示病人及医生。（5）来历不明标本。二、临床标本的处理与保存1、血清（浆）标本用于DNA检测的标本（如HBV）按一般血清标本处理对结果影响不大，但对于RNA检测的标本（如HCV）应尽快（2小时内）分离血清（浆）短期（15天内）可于-20℃保存，长期保存-70℃以下。2、全血标本全血标本应注意抗凝剂的选择用EDTA或枸橼酸钠抗凝而不能用肝素抗凝因为肝素是Taq酶的强抑制剂并且在核酸提取的过程中难以去除，用于DNA检测的全血标本可于

5、4℃短期保存，用于RNA检测的标本应尽快提取RNA。对于全血标本制备单个核细胞主要有两个途径：1）使用淋巴细胞分离液分离。2）使用红细胞裂解液,裂解红细胞后经生理盐水洗涤可得单个核细胞,单个核细胞如不提取核酸可保存于-70℃以下。3、痰常用于结核杆菌的检测的痰标本，由于痰标本中含有大量粘蛋白和杂质，故在核酸提取前，需对标本进行初步处理，即用1mol/LNaOH液化。需注意的是，液化时不能加热，液化时间不能过长。液化标本如不立即用于核酸提取，可保存于-70℃下。此外，如用于非结核杆菌如肺炎支原体的PCR检测，痰标本只能室温悬浮于生理盐水中，充分振荡混匀，促使大块粘状物下沉，

6、取上清离心，所得到的沉淀物即可用于核酸提取。4、棉拭子在使用PCR方法检测性病病原体时，临床标本一般为棉拭子，可将棉拭子置于适量生理盐水中，充分震荡洗涤后，室温静置5~10分钟，待大块物下沉后，取上清立即离心，其后的沉淀即可用于DNA的提取。如不立即用于核酸提取，则需要保存于-70℃下。5、脓液脓液的处理依情况而定，如用于分枝杆菌（如结核杆菌）核酸测定的标本，粘稠的脓液可采用痰标本的处理模式，先进行液化，再离心取沉淀提取DNA；水样的脓液则直接离心，沉淀用生理盐水洗2~3次后，即可用于DNA提取。对于用于非分枝杆菌测定的脓液标本，如过于粘稠则加入适量生理盐水，充分振荡后，

7、静置，取上清立即离心，沉淀用于DNA提取；如为水样，则按上述直接离心取沉淀即可。沉淀标本的保存条件同样为-70℃。6、体液临床体液标本包括胸水，腹水，脑脊液，尿液等，可按水样标本的方式离心取沉淀后，提取核酸。沉淀样本的保存同上。7、组织组织有新鲜组织块和石蜡切片。新鲜组织块的处理步骤首先用生理盐水洗两次，然后将其捣碎或切碎，加入生理盐水后剧烈震荡混匀，离心，弃上清，再用蛋白酶K消化后提取核酸。新鲜组织最好是保存于50%乙醇中，具体办法是，先用生理盐水将组织洗一次，切成宽度小于1cm的小片，加入适量的生理盐水，然后，边摇边加入无