毒理学实验指导一、二.doc

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1、《食品毒理学》实验指导综合实验（四氯化碳）对肝脏谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)的影响实验实验一半衰期的测定-比色法测定水杨酸钠的血浆半衰期实验二血液红细胞、白细胞计数*所需实验仪器：电子天平、pH计（试纸）、显微镜、分光光度计、灌胃针头、（小）/（大）离心机、注射器。5实验一半衰期的测定-比色法测定水杨酸钠的血浆半衰期一、原理、目的药物血浆半衰期t1/2即血浆药物浓度下降一半所需的时间。绝大多数药物是按一级动力学规律消除（恒比消除），因此每种药物都有固定的t1/2，不因血浆浓度高低而改变。本实验用分光光度法测定水杨酸钠的血浆浓度并

2、计算t1/2。水杨酸钠为抗炎药，经肝代谢，在酸性环境中与三氯化铁生成一种紫色的络合物，在520nm波长下比色，其光密度与水杨酸浓度成正比。通过测定水杨酸钠的血浆半衰期，使学生了解水杨酸钠在体内的消除速度，并掌握其血浆半衰期的测定方法。半衰期是判断毒物蓄积程度的重要参数，对中毒和解毒有一定的实践意义。二、试剂、器材及动物离心管、试管、磅秤、玻璃棒、注射器、吸管、离心机、721型分光光度计；三氯醋酸、水杨酸钠、三氯化铁；兔。三、方法步骤1、取离心管和试管各5支，分别标为1~5号，备用。5支离心管各加入10％三氯醋酸7ml。2、取兔1只，称体重，从

3、耳静脉取血2ml置入1号离心管，用玻璃棒搅拌。然而自耳静脉注入10%水杨酸钠(剂量为150mg/kg)，并立即和60min后两次自另一耳静脉取血2ml，分别注入2、3号离心管中，搅拌。4、5号离心管分别加入蒸馏水和0.02%水杨酸钠2ml。3、取上述5支离心管进行离心(2000r/min，5min)，准确吸取上清液6ml放入编号相对应的试管中，分别滴入10%三氯化铁12滴(0.6m1)摇匀5min后比色。4、用721型分光光度计510nm波长比色，以4号管调“0”，读得5号管光密度为x，再以1号管调“0”，读得2号管为x1，3号管为x2，将上

4、述操作归纳为下表：水杨酸钠血浆半衰期的测定试管名编号三氯醋酸（ml）兔血（ml）0.02%水杨酸钠（ml）蒸馏水（ml）离心上清液（ml）三氯化铁（gtt）对照172——612立即272——61260min372——612空白47——2612标准57—2—6125、计算半衰期①求k值：k=y/x;y=0.02②求水杨酸钠血浓度：给药后立即血浓度y1=kxl；给药后60min血浓度y2=kx2。③根据下列公式求半衰期：0.301(lgy1-lgy2)/tt1/2=四、结果结果测定5号管光密度（x）2号管光密度（x1）3号管光密度（x2）t1/2

5、5实验二血液红细胞、白细胞计数A【红细胞计数】红细胞计数（redbloodcellcount，RBC）是指计算每升血液内所含红细胞的数目。红细胞计数的方法有显微镜计数法、血沉管计数法、光电比色法、血细胞电子计数器计数法等。目前在临床上使用最广泛的是显微镜计数法（计数板法）。一、原理血液经稀释后，充入血细胞计数板，用显微镜观察，计数一定容积内的红细胞数并换算成每μl内的数目。二、器材1、改良式血细胞计数板：临床上最常用的是改良纽巴（Neubauer）氏计数板，它是由一块特制的玻璃板构成，玻璃板中间有横沟将其分为三个狭窄的平台，两边的平台较中

6、间的平台高0.1mm。中央平台又有一纵沟相隔，其上各刻有一个计数室。每个计数室划分为9个大方格，每一大方格面积为1.0mm2，深度为0.1mm；四角每一大方格划分为16个中方格，为计数白细胞用。中央一大方格用双线划分为25个中方格，每个中方格又划分为16个小方格，共计400个小方格，此为红细胞计数之用。2、血盖片：专用于计数板的盖玻片呈长方形，厚度为0.4mm。3、沙利氏（shali）吸血管或红细胞稀释管，5ml吸管、中试管。4、显微镜，计数器等。5、稀释液：0.85％氯化钠溶液。三、方法试管稀释法5用5ml吸管吸取红细胞稀释液3.

7、98ml（或4ml亦可）置于试管中。用沙利氏吸血管吸取全血样品至20μl刻度处（或吸血至刻度10处，红细胞稀释液用2ml）。擦去吸管外壁多余的血液，将此血液吹入试管底部，再吸、吹数次，以洗出沙利氏管内粘附的血细胞，然后试管口加塞，颠倒混合数次，再用毛细吸管（或玻棒）吸取已稀释好的血液，放于计数室与盖玻片接触处，即可自然流入计数室中。注意充液不可过多或过少，过多则溢出而流入两侧槽内，过少则计数池中形成气泡，致使无法计数。计数时，先用低倍镜，光线要稍暗些，找到计数室的格后，把中央的大方格置于视野之中，然后转用高倍镜。在此中央大方格内选择四角与最

8、中的五个中方格（或用对角线的方法数五个中方格），每个中方格有16个小方格，所以共计数80个小方格。计数时注意压在左边双线上的红细胞计在内，压在右边双线上的红细胞则不