食品毒理学实验指导

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1、食品毒理学实验指导西南大学食品科学学院实验一血细胞的计数【目的要求】学习红细胞、白细胞计数的方法。【基本原理】血液中血细胞数的计算是使用血细胞计数板。而且要用适当的溶液将血液稀释后，放入计数板的计数室内，在显微镜下计算一定容积血液稀释液中的血细胞个数，再将所得结果换算为1mm3血液中的血细胞个数。【动物与器材】血细胞计数板、玻璃毛细吸管、1ml和5ml吸管、表面皿、显微镜、刺血针、酒精棉球、红细胞稀释液、白细胞稀释液。【方法与步骤】1．血细胞计数板的结构血细胞计数板为一块特制的长方形厚载玻片，在中部1／3面积处有4条槽。内侧2条槽之间还有1条横槽相通

2、，因此在中部构成2块长方形平台。此平台比整个载玻片的平面低0.1mm。平台中部各刻有1个含9个大方格的方格网，为计数室。每1个大方格边长1mm，面积为1mm2，体积为0.1mm3。四角的每1个大方格又被分为16个中方格，适用于白细胞、血小板和培养细胞的计数。中央的大方格则由双线划分为25个中方格，每个中方格面积为0.04mm2，体积为0.004mm3，每个中方格又分成16个小方格，适用于红细胞、微生物细胞的计数。2．采血管采血管为一细长、均匀的毛细玻璃管，其上有2个刻度，前端刻度指示的容量为10mm3，后端的为20mm3，尾端与1个带孔的橡皮吸球相连

3、。3．采血及稀释（1）用1mL吸管准确吸取0.38mL白细胞稀释液，放入1支干净的小试管内，加塞备用。用5mL吸管准确吸取3.98mL红细胞稀释液，放入另1支干净的中试管内，加塞备用。（2）用消毒干棉球醮75％乙醇消毒左手无名指或耳垂边缘（或兔的耳缘静脉采血部位），待酒精挥发后用采血针刺入皮肤约2～3mm深，让血液自然流出。采血时必须待皮肤上的消毒酒精挥发后才能穿刺，否则流出的血液不能成滴，无法吸取。用消毒干棉球拭去第1滴血液，待流出第2滴血成大滴时，用采血管吸血至20mm3刻度处。吸血时应注意，不可2过度挤压组织以图加速血液流出；吸血时应尽量利用毛

4、细管现象使血液自动进入吸管内。操作要快，以防止血液凝固。若血柱超出规定刻度1～2mm，可用干棉球轻触管口（此时须执管于水平位置），吸去多余部分，使血液面恰至规定刻度处。拭去附着于吸管尖端外部的血液。若血液面超过规定刻度2mm以上或吸入气泡，则应重新吸取血液。将血液吹入盛有白细胞稀释液的中试管底部，轻轻摇振试管1～2min，以摇匀稀释的血液。（3）趁出血处尚有血液流出，及时用另一支采血管依同样方法吸血至20mm3刻度处，并将血液吹入盛有红细胞稀释液的中试管底部。轻轻摇振试管1～2min，以摇匀稀释的血液，但不可用力过猛，以免发生泡沫。4．充液2类血细胞

5、计数分2次充液，方法如下。（1）取干净的计数板平放于实验桌上，将盖玻片置入计数板正中央。计数板和盖玻片在使用前必须用软绸或擦镜纸擦净，并在低倍镜下检查计数室是否干净，其刻度是否清晰。用小滴管吸取稀释血液，并将管尖轻轻斜置于盖玻片边缘，让稀释血液缓慢流出，借毛细管现象而自动流入计数室内。一般应一次充液使计数室内充满稀释血液，若经几次充液，易形成气泡，应洗净计数板和盖玻片，干燥后重新充液。（2）稀释的血液充入计数室后，静置2～3min，待细胞不再浮动后，于低倍镜下计数。5．计数为防止重复计数和漏数，计数时应遵循一定的顺序进行，即“从左到右，自上而下”；对

6、正好压在格线上的血细胞，依照“数上不数下，数左不数右”的原则进行计数（图1-2）。如计数白细胞时发现各大方格的白细胞数相差8个以上，计数红细胞时发现各中方格的红细胞数最多与最少相差20个以上时，则表示血细胞分布不均匀，必须将稀释的血液摇匀后再重新充入计数室计数。6．计算（1）白细胞数将四角的4个大方格内数得的白细胞总数乘以50，即得每立方毫米血液内的白细胞总数，也可将对角两个大方格内数得的白细胞总数乘以100。即得每立方毫米血内的白细胞总数因为：稀释液0.38mL加入血液20mm（31mL＝1000mm3，图1-2血细胞计数方式实心圈表示应计数的红细

7、胞故20mm3＝0.02mL,），使血液稀释20倍，换算成未稀空心圈表示不应计数的红细胞释血时应乘以20。在计数时仅统计四角的4个大方格内的白细胞，其容积为lmm×1mm×0.1mm×4＝0.4mm3，换算成每立方毫米时应乘以2.5。这样，把四角4个大方格内数得的白细胞总数乘以50（即20×2.5＝50），即得每立方毫米血内的白细胞总数。（2）红细胞数将中央大方格中的四角和中央的中方格共5个中方格内数得的红细胞总数乘以10000，即得每立方毫米血内红细胞的总数。因为：稀释液3.98mL，加入血20mm3（即0.02mL），使血液稀释200倍，换算成未

8、稀释血时应乘以200。在计数时仅统计0.02mm3内的红细胞（1个中方格的容积为0.2mm×0.2mm×0.