细菌转化实验步骤.doc

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1、2015.11.01细菌转化：1.将质粒和感受态细胞从冰箱中取出，放入冰上2.在无菌操作台中，将质粒1微升加入到感受态菌20-30微升中（不要用手捂菌，手也不要碰到EP管盖）3.冰上30min，每隔5min轻摇EP管4.将混合液在42℃中热激90s，将质粒粘附在感受态细胞表面，立即冰上静置1min5.加入200微升LB培养基，轻轻摇匀，37℃振荡1-2h(45min)，使菌恢复正常6.涂板，倒扣平板12-24h7.挑取单克隆，扩大培养（培养基中加入相应抗生素，每100ml培养基加100微升抗生素）37℃摇菌（不超过16h）8.提质粒Attention：涂布平板时三角涂布棒刚烧完后记得冷却一下！

2、！！！！涂布平板的方法：用枪将液体滴加到中间，然后从内往外画圆稀释菌，以便最后在边缘处得到单克隆扑灭酒精灯：盖的时候多盖几下在倒扣平板前要先让培养基吸收菌，故先正放十几分钟，然后再倒扣起码14h让菌张起来。这个过程中不要开摇晃，直接37℃放置就好。