原生质体培养ppt课件.ppt

《原生质体培养ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、植物原生质体培养09级植物学李宏富Thecultivationofplantprotoplast原生质体的分离与培养概念及研究现状原生质体培养与其它生命学科植物原生质体培养原生质体(protoplast)：脱去细胞壁、裸露的细胞。又称原生质球。原生质体是为质膜所包围的裸露细胞。亚原生质体(subprotoplast)在原生质体分离过程中，有时会引起细胞内含物的断裂而形成的一些较小的原生质体。它可以具有细胞核，也可不具有细胞核。核质体(nuclearplast)由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的

2、小原生质体。也称为微小原生质体。胞质体(cytoplast)不含细胞核，而仅含有细胞质的原生质体。现代生物技术领域中的地位原生质体研究历史与现状1880年，Hanstein首次起用原生质体（protoplast)一词。在20世纪初，原生质体研究领域的先驱者,曾经用机械法制备原生质体。1960年，Cocking首次应用酶解法制备番茄根原生质体获得成功。1971年，Takebeetal.首次得到烟草叶肉原生质体培养的再生植株。原生质体研究历史与现状1983，1987和1991年举行的第六，七，八届国际

3、原生质体会议，确定了原生质体在基因操作应用中的地位1985年，Fujimuraetal.第一例禾谷类作物—水稻原生质体培养再生植株。1986年，Spanggenbergetal.单个原生质体培养再生植株在甘蓝型油菜上获得成功。原生质体研究历史与现状80年代中期，约有100种植物获得成功。80年代末，成功再生植株的种类增加到了212种。至今原生质体培养可形成胚状体并再生植株或芽的种类已经达到367种，分布于46科，160属，其中成功报道最多的是茄科，其次是豆科、禾本科、菊科、十字花科、伞形科、蔷薇科

4、。原生质体研究历史与现状我国的发展概况原生质体培养的再生植株:烟草、胡萝卜、矮牵牛原生质体融合：小麦×蚕豆、小麦×玉米、水稻×豌豆酶制剂：制备的酶的酶制剂活性与国外相当a、在基础理论方面进行细胞壁的再生、细胞膜离子转运、病毒浸染机理研究的最佳试验材料；分离细胞器和易破坏的大分子方面具有优越性。b、作物改良方面通过原生质体融合再生植株可克服远缘杂交的不亲和性；通过体细胞杂交可转移胞质基因；原生质体是遗传转化的理想受体。意义植物原生质体的分离和培养材料预处理原生质体分离的方法原生质体纯化原生质体活力测

5、定影响原生质体数量和活力的因素原生质体培养方法影响原生质体培养的因素原生质体再生过程用于分离原生质体的材料可以用各种组织和器官，但多应用叶片、愈伤组织及悬浮培养细胞。以及茎尖、根尖、子叶和胚性组织。材料预处理用黑暗处理、低温处理和不同光质照射等方法，可提高某些材料原生质体的产量和活力。☆龙胆试管苗的叶片用4oC处理较好。☆甘蔗植株必须先在黑暗下培养12h后分离的原生质体才能分裂。☆马铃薯试管苗叶片需在黑暗下处理48h后分离原生质体，才能获得高产量。原生质体分离的方法机械分离法酶解分离法机械分离法：

6、先将细胞放在高渗糖溶液中预处理，待细胞发生轻微质壁分离，原生质体收缩成球形后，再用机械法磨碎组织，从伤口处可释放出完整的原生质体。缺点：获得完整的原生质体的数量比较少，能够用此法产生原生质体的植物种类受到限制。优点：该方法可避免酶制剂对原生质体的破坏作用。酶解分离法：指将材料放入能降解细胞壁的混合等渗酶液中保温一定时间，在酶液的作用下，细胞壁被降解，从而获得大量有活力的原生质体的方法。常用的酶种类：纤维素酶类（纤维素酶、半纤维素酶、崩溃酶[Driselase]）、果胶酶类（果胶酶和离析酶[Mace

7、rozyme]）、蜗牛酶和胼胝质酶。酶来源生产厂家纤维素酶类OnozukaR-10绿色木霉YakultHonshaCo.Ltd.,Tokyo,JapanCellulysin绿色木霉Calbiochem.,SanDiego,CA92037,USADriselaseIrpexlutensKayowaHakkoKogyoCo.,Tokyo,Japan酶来源生产厂家果胶酶类MacerozymeR-10根霉YakultHonshaCo.Ltd.,Tokyo,JapanPectinase黑曲霉SigmaChe

8、micalCo.PectolyaseY-23黑曲霉SeishinPharm.Co.Ltd.,Tokyo,Japan半纤维素酶RhozymeHP-150黑曲霉RohmandHassCo.,Rhiladelphia,UAS酶解法的优缺点优点：获得量大，适用广泛。缺点：商品酶制剂均含有核酸酶、蛋白酶、过氧化物酶以及酚类物质，会影响所获原生质体的活力。沉降法漂浮法不连续梯度法原生质体纯化的方法飘浮法Protoplast采用比原生质体密度大的高渗溶液（蔗糖、Percoll、Ficoll），使