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1、乳品中活性益生菌选择性检测方法探究 摘要:乳制品中富含益生菌，对乳产品的营养价值具有较大影响。本文针对如何定量分析乳制品中的热乳链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌和干酪乳杆菌进行了讨论和分析，并设计了相关试验进行理论论证。最终实验结果显示：用RI-琼脂培养基来分离热乳链球菌能够收到显著效果;可用KL-乳酸菌培养基来分离干酪乳杆菌;用NGV-MMWN氨基培养基分离双歧杆菌;NLH-pC7.1碳酸培养基分离和提取保加利亚乳杆菌;NUL-氧脂酸分离和提取嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌;如果只需要提取和分
2、离嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌,则可在计算其总数量之后，在用NL-碳酸基培养基分离干酪乳杆菌数,剩余即为嗜酸乳杆菌数量。关键词:乳品;活益生菌;检测；研究中图分类号：TS252文献标识码：A文章编号：0绪言6随着人民生活水平的不断提高，乳制产品的种类日益丰富和多样化，人体所需的乳酸菌如嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜热乳链球菌和保加利亚乳杆菌等通常被作为重要成分加入到各种乳产品当中。乳制品被人体摄入之后，其中包含的活性菌也同时进入到人体内部消化系统，它们能够帮助平衡肠胃功能健康，抑制对人体有害的各类细菌
3、繁殖，能够显著提高人的身体健康水平。但不是随便摄入活性菌就能够起到这种效果，而是需要摄入人体内的活性菌达到一定的数量才能够有效发挥作用。科学表明，人体内部活性菌数量要达到97cfu/g(mL)以上才能够具有明显效果。实际上，科学家在对市场上出售的各种乳制品的研究分析发现，大多产品中的包含的乳酸菌的活跃度与浓度都严重偏低，这一方面是由于生产企业不负责任所导致，另一方面也与当前缺乏一种行之有效的活性乳酸菌检测工具有关，因此也不难理解当前市面上为什么存在那么多含超低乳酸菌的乳制品。为有效检测出乳制品中活性乳
4、酸菌的活力和浓度，市场上和学术界都有必要尽快找到一种科学有效的计算方法。当前，对于嗜酸乳杆菌、双歧杆菌等计数方法已有一些研究文献，但都不是在其纯度较低条件下的计数方法，笔者通过文献综述发现，关于其他菌类计数方面的研究也有学者尝试过，但并没有取得突破性进展。对此，本文在已有研究文献的基础上，总结了一种新的非纯度条件下对活性菌计数的方法，能够有效针对嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜热乳链球菌和保加利亚乳杆菌进行科学合理的定量分析，为提高软制品产品品质提供可靠度科学测量工具。1材料与方法1.1供试菌种嗜
5、热乳链球菌(Streptococcusthermophilus,6ST)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillusdelbrueckiissp.bulgaricus,LB)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus,LA)、双歧杆菌(Bifidobacteria,BB)、干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei,LC)均由华中农业大学生物科技学院微生物实验室提供。1.3仪器与设备厌氧培养箱;厌氧培养罐;好氧培养箱。1.4待检样品(1)已知菌样品:以脱脂乳为培养基,在所需培
6、养条件下分别培养供试的5种菌,即为已知菌待检样品。(2)乳品样品:为市售酸乳或乳酸菌发酵乳饮料,均含有活性乳酸菌。2结果与分析2.1嗜热乳链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌和双歧杆菌对糖的利用情况将MRS琼脂培养基中的葡萄糖分别以柳醇、纤维二糖、果糖、甘露醇、山梨醇等糖类代替,配制成系列不同的MRS琼脂培养基,并制成平板,分别接种ST、LB、LA和BB菌株,在所需条件下培养,观测平板上菌落的生长情况,结果如表2所示。从表2可以看出:仅LA可以利用柳醇,故MRS-柳醇琼脂培养基可用于LA的选择计数。当柳
7、醇质量浓度为0.5%时,LA便可形成大小合适的菌落。另外,MRS-6纤维二糖琼脂、MRS-甘露醇琼脂和MRS-山梨醇琼脂也可用于LA的计数。2.2不同培养基平板上ST、LB、LA、BB和LC形成的菌落数检测结果按照国内外文献介绍的最先进的方法制成十种各不相同的实验培养基,并制成平板,分别接种ST、LB、LA、BB和LC的纯培养菌株,观察检测菌落的形成和数量，并分别做好相关试验数据记录。检测结果表明:ST-琼脂和M17-琼脂适合嗜热乳链球菌的计数;LC-琼脂适合干酪乳杆菌的计数;MRS-NNLP琼脂适合
8、双歧杆菌的计数;MRS-pH5.2琼脂适合保加利亚乳杆菌的计数。MRS-柳醇琼脂、MRS-山梨醇琼脂、MRS-核糖琼脂和MRS-葡萄糖酸盐琼脂均可用于LA和LC的计数,但因LC-琼脂培养基能抑制LA和BB的生长,从而适宜于LC的选择计数,因此当产品中只有LA和LC存在时,可用LC-琼脂测定LC的菌落数,再用MRS-柳醇琼脂或MRS-山梨醇琼脂或MRS-核糖琼脂或MRS-葡萄糖酸盐琼脂测其总数,两者之差即为LA的数量。2.3对几种含LA和BB的市售乳品的检
