乳品中抗生素的检测方法

《乳品中抗生素的检测方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、乳品中抗生素的检测方法乳品中抗生素的检测方法乳品中抗生素的检测方法王庆忠   蒲彪（四川农业大学信息与工程技术学院，四川省雅安市  625014） 摘要：本文对检测抗生素的3种主要方法：微生物法、酶法和色谱法的设计原理和筛选策略进行了分析。论述了BSDA 、Charm Farm、Charm Cowside、Penzyme、Delvotest P、CITE Probe、Lactam Test Kit等检测方法的研究历史。比较和分析了多种方法的检测敏感性、特异性和影响检测的可能因素。最后就如何提高我国乳品的抗生素检测水平，提出了建议措施。 关键词：抗生素 检测 原理 筛选

2、 BSDA 试剂盒      经多年的实践，人们认识到抗生素可以增强牲畜抗病能力、提高养殖业产投比。但过量使用，将降低畜牧产品品质，影响乳品发酵。而含有抗生素残留的动物性产品，进入人类食物链，会使体内菌株产生抗生素抗性，扰乱机体内环境平衡，菌群失调而不利于健康；也会对易感人群产生过敏反应、激素障碍变态反应。因此，FAO及WHO早在1969年就提出应规定各种动物性食品中的抗生素残留允许标准，WHO于1979年规定原料奶及消毒牛奶中不得有抗生素。近年来，国内对奶制品中的抗生素残留也非常关注，无抗奶（Antibiotic-Free Milk）的生产和消费已成为大势所趋。但我

3、们对奶制品中抗生素的检测缺乏必要的研究，检测技术还十分落后。本文旨在对抗生素的检测方法进行总结，为在我国开展相关工作奠定基础。 1 检测原理传统检验方法是基于抗生素残留对微生物生长的抑制，以扩散过程或浑浊度为基础。抗生素浓度越高，微生物的生长受抑制程度越大，菌落越小。STOP法（当场棉拭检验）以枯草芽孢杆菌（ATCC6633）32℃下培养16-18小时测定抗生素；CAST法（兽崽抗生素和磺胺制剂实验）则是接种巨大芽孢杆菌（ATCC9885）在44℃下培养；而BSDA法（B.stearothermophilis tablet Disc Assay，嗜热脂肪芽孢杆菌圆盘检

4、验法）则采用嗜热脂肪芽孢杆菌。免疫检验法是对抗抗生素抗体的检验。基于抗生素刺激动物产生相应的应急反应，从而形成抗体。通过抗原-抗体的特异性结合，确定抗生素含量。该方法的引申是通过细胞质表皮因子（Surface Plasmon Resonance，SPR）对抗生素的特异结合，测定相应的酶活性或基质的电流变化，从而推算抗生素浓度，以实现自动化检测。使用高效液相色谱（HPLC）和质谱（MS）对抗生素进行定量、定性的测定，主要是基于它们测定痕量物质的优越性。Andrew[1]总结了6家公司8种检测试剂盒的检测原理，见表1。可看出有一半检测试剂盒是采用抑制微生物生长的原理而设计

5、的。 表1   不同检测试剂盒工作原理试剂盒 生产厂家 分析原理Charm Farm Charm Science, Inc. (Malden,MA) 抑制微生物生长Charm Cowside Charm Science, Inc. 青霉素竞争性吸附展示Delvotest P Gist-brocade Food Ingredients, Inc. 抑制微生物生长Penzyme SmithKline Beecham Animal Health 酶反应CITE Probe ICEXX Laboratories, Inc. 抗原-抗体吸附Lactam Test Kit Ide

6、tek, Inc. 竞争性酶联免疫Valio T101 Valio Finland, Research and Development Centre 抑制微生物生长Charm BSDA Charm Science, Inc.  抑制微生物生长 2 检测方法筛选策略FDA兽医学中心规定，检测方法敏感性要强，特异性要高。某项方法如要成为法定方法，其检测的最低限值应该在95%置信度的情况下，检测FDA规定的安全浓度或允许浓度（safe or tolerance level，欧盟称为MRL，Maximum Residue Limits）可能性要大于90%。可以采取以下策略筛选

7、和评价检测方法[2]：第一步，初步评价敏感性和特异性。测定特异性时，选择绝对不含抗生素的样品，其中体细胞数量（Somatic Cell Count，SCC）要<106/ml，结果为阴性。测定敏感性时，则在奶样中添加MRL水平的抗生素，结果为阳性。第二步，测定最底检测限。使用30-60个样本，其中的抗生素含量一般间于20%MRL到2倍MRL水平，绘制检测方法对不同抗生素的标准曲线。第三步，评价影响因素。采用含有内毒素，且SCC含量间于2×106-6×106个/ml的奶样，特异性要达到90%以上。第四步，现场检验。各种类型（地区、牧场规模、抗生素类型）的