产品无菌检验规程.doc

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1、1目的：建立产品无菌检验的标准操作规程，确保检验结果的准确性。2适用范围：适用于本公司产品的无菌检验。3依据GB/T14233.2-2005《医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分生物学试验方法》《中华人民共和国药典2015版》通则1101无菌检查法4设备、用具与试剂4.1设备要求百级洁净台、恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器4.2用具试管及试管架、移液管（1mL）、培养皿（90mm）、洗耳球、剪刀、钢尺、镊子、酒精灯4.3试剂硫乙醇酸盐流体培养基，胰酪大豆胨液体培养基，大豆酪蛋白琼脂培养基，纯化水，75%乙醇5试验前准备5.1培养基的

2、制备5.1.1硫乙醇酸盐流体培养基：准确称取5.85g硫乙醇酸盐流体培养基至干净的烧杯中，加入200mL纯化水，加热搅拌溶解后分装至试管中，不少于15mL/支，每批产品分装数量为10支。5.1.2胰酪大豆胨液体培养基：准备称取6g胰酪大豆胨液体培养基至干净的烧杯中，加入200mL纯化水，加热搅拌溶解后分装至试管中，不少于10mL/支，每批分装数量为10支。5.1.3上述培养基分装后，在试管上做好标记，用牛皮纸包裹好试管塞，放入高压蒸汽灭菌器中进行121℃灭菌15min。5.1.4灭菌后将两种培养基分别放于试管架上自然冷却，注意观察培养基的颜色

3、，硫乙醇酸盐流体培养基氧化层应为粉红色，且高度不得超过培养基高度的1/5。5.1.5大豆酪蛋白琼脂培养基：准确称取10g大豆酪蛋白琼脂培养基至烧瓶中，加入250mL纯化水加热充分溶解后121℃灭菌15min，待培养基于45℃左右时，将其倾注于培养皿中15-20ml备用。5.2试验用器具准备5.2.1将试验用到的剪刀、镊子、移液管（1mL）放入饭盒中进行121℃灭菌30min，灭菌后备用。5.3人员、物料进入无菌检验室5.3.1人员进入无菌检验室按照《洁净间人员净化管理规范》执行。5.3.2试验用器具、试剂、样品灭菌后放入传递窗紫外灯照射30m

4、in后进入无菌检验室。5.4无菌检验环境要求5.4.1无菌室在使用之前进行臭氧消毒。5.4.2试验开始前对百级工作台进行紫外照射30min。5.4.3无菌检验过程中检查百级工作台中的空气菌落数：每次操作时在台面的左中右位置摆放三个大豆酪蛋白琼脂培养基平皿，打开平皿盖在空气中暴露，至试验结束，盖好进行培养。3个平皿上的菌落数平均不超过1个。6试验步骤6.1样品数量每个灭菌批随机抽取3个样品进行无菌检验。6.2无菌检验方法直接接种法：取待测样品的关键部位，裁剪成一个2cm×3cm的碎片，然后接种于两种培养基中进行培养，观察并进行记录。6.3具体操

5、作6.3.1样品制备与接种无菌操作的条件下，在百级工作台中打开样品包装，将样品剪成2cm×3cm的碎片，分别放入5管硫乙醇酸盐流体培养基和5管胰酪大豆胨液体培养基中。操作时，先点燃酒精灯，左手握住装有培养基的试管，将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住塞子，拔开塞子，同时右手持灭菌镊子夹起碎片迅速投入试管中，灼烧试管口塞上塞子，使样品充分没入培养基中。剪刀和镊子每次使用之前在酒精灯火焰灼烧，保持无菌状态。取硫乙醇酸盐流体培养基1管，不接种作为阴性对照。6.3.2培养观察硫乙醇酸盐流体培养基置30~35℃，胰酪大豆胨液体培养基置2

6、0~25℃培养14d。每天观察进行记录。7结果判定7.1阴性对照管不得有菌生长。7.2若样品管均澄清，或虽显混浊但经确认无菌生长，判定符合规定；若样品管中任何一管出现混浊并证明有菌生长，则判定样品不符合规定。8检验频次：随产品的灭菌批次，每批产品灭菌后24小时内进行检测。9《无菌检验观察记录》