实验一 鱼类饲料的总消化率及其.doc

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1、实验一鱼类饲料的总消化率及其蛋白质消化率的测定一、实验目的掌握用外源指示剂Cr2O3间接测量鱼、虾饲料消化率的基本方法。二、原理与饲料均匀混合的外源指示剂Cr2O3，完全不被动物吸收而随粪便排出。根据指示剂及蛋白质(或其他营养成分)在食物及粪便中的含量变化，饲料的总消化率和蛋白质的消化率由如下两式给出：饲料总消化率：D(％)=[1－]×100蛋白质消化率：D(％)=[1－×]×100A、A’分别为饲料粪便中的粗蛋白含量；B、B’分别为饲料和粪便中的Cr2O3含量三、实验材料1．试验鱼可根据实际情况选择实验鱼的种类。但用易驯化、习惯实验环境的鱼类(如金鱼、锦鲤、罗非鱼等)较好。

2、体重20～25g，每试验组10尾。2．水族箱每试验组配50～1001容积的水族箱2个，一个作投饲槽、一个作排泄槽。3.充氧设备每水族箱配微型充气泵一台4.集粪工具每组配虹吸管1支、漏斗2个及玻璃纤维若干5.小捞网1个6.100目分样筛1个7.100ml凯式烧瓶2只8.100ml容量瓶1个，10ml容量瓶10个9．刻度移液管l套。10．凯氏定氮装置1套。11．分光光度计一台。一、试验饲料的制备试验饲料的组成可用第二章表2—7的典型配方。但其中的酪蛋白和明胶用优质鱼粉代为简便起见，也可直接使用市售鱼用饲料，经重新粉碎后使用。全部试验饲料要统—制作。所有干性原料要经粉碎，并通过10

3、0目筛。化学纯Cr2O3，也要经过100目筛。按每千克干饲料的1％准确称取Cr2O3，与少量的干性原料混合，分四级逐步扩大到全部干性饲料组分，充分混合均匀，混合操作可在大白搪瓷盆进行。因Cr2O3为绿色，所以从盆壁上是否留有团状绿色痕迹来判断混合的均匀程度，若有必要，可进行均匀度检查，变异系数要求小于5%。混合均匀程度决定试验的成败。平均每组制作200g饲料。二、投饲与粪便采集把试验鱼置于投饲槽、充气，用试验饲料暂养3天。每天清理粪便及残饵，并适量换水。停食数小时后，再一次投足量试验饲料让鱼群饱食。然后，用捞网把鱼捕到条件完全相同的排泄槽。开始观察排粪，排粪后及时用虹吸管收取

4、，经玻璃纤维过滤，收集烘干，保存作分析用。虹吸过程尽量不要把条状粪便弄破。为了获得可靠的结果，通常要同时作三个重复组，或把排粪后的鱼再移回投饲槽喂饱，再移到排泄槽，再收集粪便，如此重复两次。但这里仅为了掌握基本方法、收集足够供分析的粪便即可(约300mg干品)。一、样品分析对干燥至恒重的饲料及粪便样品，进行粗蛋白及Cr2O3的定量分析。粗蛋白分析按生物化学实验中的凯氏定氮法进行。下面介绍Cr2O3的湿式灰化定量法。精确称量样品50一l00mg（含Cr2O31—3mg)置于l00ml凯氏烧瓶中，加浓硝酸(比重1.42)5ml，加热氧化约20min，当溶液中产生白色固形物时，停止

5、加热。放冷后，徐徐注入3ml过氯酸(70%)，加热使溶液从绿色经黄色而急变为褐色，再继续加热l0min放冷，以蒸馏水定容至l00ml。于波长350nm处测量光密度，以蒸馏水作对照。标准曲线的制定：精确称量5mg分析纯Cr2O3，用与样品一样的方法消化，但最后以蒸馏水定容至10ml，作为母液。每毫升Cr2O30.5mg。从母液中分别吸取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8相0.9ml于10ml的容量瓶中，用蒸馏水分别定容至l0ml，便得到相当1：l00ml溶液中含Cr2O3为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0和4.5mg的浓

6、度系列溶液。同样在350nm处测量其光密度。根据浓度和光密度值的关系制作标准曲线；并可用回归分析的方法把二者的相关关系建立起来。根据样品的光密度值在标准曲线L或用回归方程获得样品中Cr2O3的含量。二、消化率的计算及不同实验组间的结果比较根据凯氏定氮法测得的饲料及粪便的蛋白质水平，以及以上获得的Cr2O3数据，用上述计算公式，便可靠出饲料的总消化率及蛋白质消化率。因为不同试验组所用的试验饲料一样，试验鱼及试验条件相似，方法相同，所以其结果有很强的可比性。各试验组可将试验结果与其他组的结果进行比较，并予讨论。