实验报告4.1 叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定.doc

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1、装订线实验报告课程名称：植物生理学实验（乙）指导老师：成绩：__________________实验名称：叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定实验类型：一、实验目的和要求了解改良半叶法、氧电极法测定光合作用和呼吸作用的基本原理，掌握红外线CO2分析仪法测定光合作用和呼吸作用，蒸腾速率和气孔导度测定的基本原理;掌握用LI-6400测定光合作用、呼吸作用、蒸腾速率和气孔导度的方法，测定光-光合响应曲线的方法.二、实验基本原理（一）改良半叶法测定光合作用（二）熟悉仪器基本结构，及按装调试。以榕树和蚕豆等植物为材料，用LI-6400portableph

2、otosynthesissystem测定它们的光合作用、呼吸作用、蒸腾速率和气孔导度及光-光合响应曲线，通过比较分析其属于什么光合类型植物。Principlesformeasuringphotosynthesisandrespiration6CO2+6H2O6(CH2O)+6O2一）测干重——改良半叶法：同面积光暗叶片重量差。使用三氯乙酸（TCA）涂抹在叶片叶柄处，阻断叶片在进行光合作用的时候向外输出营养物质。测定的为总光合作用量。二）测放O2 ——氧电极法。气相和液相。氧电极的原理：氧电极是由嵌在有机玻璃上的铂和银所构成，以0.5mol/L KCl为电解质

3、，电极头外覆盖一层聚乙烯或聚四氟乙烯薄膜，其厚度在15～25μm之间，用“〇”形套膜环固定，使电极与被测溶液隔离，而溶解在溶液中的氧仍能透过薄膜，进入电极内。较薄的膜易透过氧，因而对氧浓度变化的响应时间短.三）红外线CO2分析仪法：CO2吸收4260nm红外线,有封闭式：单位时间内CO2下降量和开放式：参比室和叶室CO2差值 本实验将采用开放式测得。三、实验材料与试剂1.实验试剂：三氯乙酸（TCA）2.实验材料：树叶、菜豆四、实验器材与仪器天平、湿毛巾、烘箱、打孔器、游标卡尺、剪刀、LI-6400portablephotosynthesissystem五、实

4、验操作方法和步骤（一）改良半叶法：光照不少于1.5h，注意测定打孔器内径（计算面积）。放入铝盒中，开盖放进烘箱后，下周实验时测定重量（如回潮，需再烘干）。(二)CO2红外分析法（LI-6400便携式光合作用测定系统）测定瞬时光合速率、光响应曲线等。1.打开叶室夹好叶片，关紧叶室，按１，F5（Match) → F5(IAGR Match)，F1(exit)→开灯，按2,F5（Lamp off）选Quantum flux, 输入光强值（500-1500 ） →按1，F1（Open Logfile），命名文件名ＸＸＸ及附加标记（植物，处

5、理，组号等）  →观察 Photo稳定时，按采样键F1（ＬＯＧ）或测定器黑钮5次（一般同一叶片应测5次值）。 2. 在完成采样（LOG）后，按５，按F1（AUTOPROG）,找Light curve, 名命及做标记,按Y(使测量数据紧随上述数据后)。设置光强（从高到低，光强间用1空格隔开。高光强下点间隔大，低光强下点间隔小，常用2000 1500 1000 600 300 200 100 50 30 10 0，光强为0时为呼吸速率），设置测定装订线时间间隔的最小值和最大值，设置叶室和参比室间应进行自动匹配的CO2浓度，按Y开始自动

6、测量。 3.数据保存和取出。采样完后按１，Close file,按F5，end进入SLEEP（同一班只需一个file，不同的组可以用区分)。与电脑连接，解除SLEEP，进入F5(Utility Manu)选择File exchange mode。打开电脑winPX for 6400,在LI-6400/User下把自己要的测定文件拖入专设目录。在EXCEL下选择所有文件在文本导向下，选择“，”打开。六、实验数据记录和处理：（一）半叶法光照下叶片重量黑暗中叶片重量光照时数打孔器内径0.396g0.338g1.5h1.180cm1.160cm1

7、.092cm干重增加总数（mg）干重增加总数m=58mg切取叶面总和S=1.028×10-2dm2=3761.35mg/(dm2∙h)光合作用强度=切取叶面总和（dm2）×光照时数（h））（二）CO2红外分析法表1、饱和光下不同植物光合、呼吸和蒸腾速率、气孔导度及水分利用效率(平均值±标准差)PlantsPn(μmol.m-2s-1)R(μmol.m-2s-1)Tr(mmol.m-2s-1)SC(molH2Om-2s-1)WUE菜豆（本组）10.28800761.0084312983.055740940.1619239573.36678003910.4231

8、18570.9732478653.059967309