叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定.ppt

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1、叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定省培项目一、实验目的和要求：掌握植物中叶绿体色素的提取分离和性质鉴定、定量分析的原理和方法。二、实验内容和原理：以菠菜为材料，提取和分离叶绿体色素并进行理化性质分析和叶绿素含量测定。1、叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取。2、叶绿素的荧光现象透射光下呈绿色反射光下呈暗红色3、取代反应CCCCNCCCCNCCCCNCCCCNHHCCHHCCCH2CHCH3R1—H3CH3C——CH3CCCCNCCCCNCCCCNC

2、CCCNCuCCHHCCCH2CHCH3R1—H3CH3C——CH3褐色绿色C32H30ON4MgCOOCH3COOC20H39+2KOHC32H30ON4MgCOO—COO—+2K++CH3OH+C20H39OH4、皂化反应？？5、定量分析：叶绿素吸收红光和兰紫光，红光区可用于定量分析，其中665和649用于定量叶绿素a,b及总量，而652可直接用于总量测定abRelativeabsorbtanceWaverlength(nm)实验步骤1．定性分析：取鲜叶3-5g+95%乙醇15-25ml（逐步加入）,

3、磨成匀浆过滤入三角瓶中观察荧光现象透射光色，反射光光。皂化反应(约1ml)加KOH数片剧烈摇均，加石油醚1ml和H2O1ml分层后观察上层呈色，为，吸收光。下层呈色,为,吸收光。取代反应（约1mL）加醋酸约1ml，变褐为_________叶绿素,取1/2加醋酸铜粉,加热变色，为叶绿素。定性实验无需移液管量2、叶绿素和类胡萝卜素的吸收光谱测定：皂化反应的上层黄色石油醚溶液弃上层，反复用石油醚萃取,直到无类胡萝卜素,得叶绿素(盐)在400-700nm处扫描光谱，分别测定类胡萝卜素和叶绿素的吸收峰（稀释470

4、nmOD0.5-1）（稀释，665nmOD0.5-1）3．叶绿素定量分析：称取鲜叶0.1g，加1.9mlH2O，磨成匀浆，取2份0.2ml分别加95%酒精4.8ml,摇匀，8000转离心5min,上清液在649，652，665测定OD，计算Chla,Chlb和Chl总量的值。五、实验数据记录和处理Ca(mg/L)=13.95A665-6.88A649Cb(mg/L)=24.96A649-7.32A665CT(mg/L)=Ca+Cb或A6521000/34.51、您所测得的总叶绿素含量为多少？请列出计算过

5、程。2、为什么叶绿素吸收红光和蓝紫光？3、叶绿素a、b在蓝光区也有吸收峰，能否用这一吸收峰波长进行叶绿素a、b的定量分析？为什么？4、讲义P47-4