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时间:2020-09-22
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1、微生物学实验基本知识与准备适用课程:《药用微生物》《微生物药品检定技术》实验一微生物学实验基本知识与准备一、目的要求熟读与牢记微生物学实验规则和安全;了解微生物实验室基本组成;熟知微生物实验室常用设备。一、实验规则和安全1.每次实验前必须对实验内容进行充分预习,以了解实验的目的、原理和方法,做到心中有数,思路清楚。2.在整个实验过程中必须穿上实验服,留长发者,必须将长发挽在背后。实验台上除了记录本和笔(记录笔和记号笔)以外,不准堆放任何个人物品。3.认真及时做好实验记录,对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验,则需记下每次观察的现象和结果,以便分析。4.实验室内应保持整洁
2、,勿高声谈话和随便走动,保持室内安静。5.实验时小心仔细,全部操作应严格按照操作规程进行,禁止用嘴吸取菌液或试剂,万一遇有盛菌试管或瓶不慎打破、皮肤破伤等意外情况发生时,应立即报告指导教师,及时处理,切勿隐瞒6.实验过程中,切勿使乙醇(酒精)乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇火险,应先关掉火源,再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火器。7.使用显微镜或其他贵重仪器时,要求细心操作,特别爱护。显微镜的目镜在使用前后必须用浸有乙醇(酒精)的透镜纸擦净。对消耗材料和药品等要力求节约,用毕后仍放回原处,严禁将药匙交叉使用。8.每次实验完毕后,必须把所用仪器抹净放妥,将实验室收拾整齐,
3、擦净桌面,如有菌液污染桌面或其他地方时,可用3%来苏尔液或5%石炭酸液覆盖半小时后擦去,如系芽孢杆菌,应适当延长消毒时间。凡带菌之工具(如吸管、玻璃刮棒等)在洗涤前须浸泡在3%来苏尔液中进行消毒。9.每次实验需进行培养的材料,应标明自己的组别及处理方法,放于教师指定的地点进行培养。实验室中的菌种和物品等,未经教师许可,不得携出室外。10.每次实验的结果,应以实事求是的科学态度填入报告表格中,力求简明准确,认真回答思考题,并及时汇交教师批阅。11.离开实验室前将手洗净,注意关闭门窗、灯、火、煤气等。二、微生物实验室构造微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和
4、普通实验室六部分组成。这些房间的共同特点是地板和墙壁的质地光滑坚硬,仪器和设备的陈设简洁,便于打扫卫生。(一)准备室准备室用于配制培养基和样品处理等。室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、试验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。(二)洗涤室洗涤室用于洗刷器皿等。由于使用过的器皿已被微生物污染,有时还会存在病原微生物。因此,在条件允许的情况下,最好设置洗涤室。室内应备有加热器、蒸锅,洗刷器皿用的盆、桶等,还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。(三)灭菌室灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌,室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。(四)无菌室无菌室也称接种室,是
5、系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。在微生物中,菌种的接种移植是一项主要操作,这项操作的特点就是要保证菌种纯种,防止杂菌的污染。在一般环境的空气中,由于存在许多尘埃和杂菌,很易造成污染,对接种工作干扰很大。4.1无菌室设置无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。其基本要求有以下几点:(1)无菌室应有内、外两间,内间是无菌室,外间是缓冲室。房间容积不宜过大,以便于空气灭菌。最小内间面积2×2.5=5m2,外间面积1×2=2m2,高以2.5m以下为宜,都应有天花板。(2)内间应当设拉门,以减少空气的波动,门应设在离工作台最远的位置上;外间的门最好也用拉门,要设在距内间最远的
6、位置上。(3)在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上,应开一个小窗,作接种过程中必要的内外传递物品的通道,以减少人员进出内间的次数,降低污染程度。小窗宽60cm、高40cm、厚30cm,内外都挂对拉的窗扇。(4)无菌室容积小而严密,使用一段时间后,室内温度很高,故应设置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上(即离工作台最远的位置),最好为双层结构,外层为百叶窗,内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、灭菌前开启,以流通空气。有条件可安装恒温恒湿机。4.2无菌室内设备和用具(1)无菌室内的工作台,不论是什么材质、用途的,都要求表面光滑和台面水平。(2)在内室和外室各安装一个紫外
7、灯(多为30W)。内室的紫外线灯应安装在经常工作的座位正上方,离地面2m,外室的紫外线灯可安装在外室中央。(3)外室应有专用的工作服、鞋、帽、口罩、盛有来苏尔水的瓷盆和毛巾、手持喷雾器和5%石炭酸溶液等。(4)内室应有酒精灯、常用接种工具、不锈钢制的刀、剪、镊子、70%的酒精棉球、工业酒精、载玻璃片、特种蜡笔、记录本、铅笔、标签纸、胶水、废物筐等。4.3无菌室的灭菌消毒(1)薰蒸:这是无菌室彻底灭菌的措施。无菌室使用了较长时间,污染比较严重时,应进行薰蒸灭菌。可用甲醛、乳酸或硫磺薰蒸。(2)喷雾:在每次使用无菌室前
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