《微生物学实验》PPT课件

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1、医学微生物学实验室规则一.进入实验室必须穿白大衣,不必需的物品不要携带入室。二.保持实验室的安静和秩序,实验要严肃认真。三.如有传染性材料的污染,及时报告老师。四.实验过程中有仪器和器材的损坏要报告老师并登记。五.实验后的材料要放到指定的位置。六.离开实验室前,要用肥皂洗手,接触过传染性强的实验材料要用0.1%的新洁尔灭泡手1-2分钟七.值日生要作好值日工作,关好水,电,门窗,作好实验记录本的登记方可离开实验室。目的要求:1、了解微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备2、了解空气、皮肤细菌检查方法3、掌握药品的微生物学检验程序和方法实验一药品的微生物限度检查（一）

2、实验室常用消毒灭菌设备空气和皮肤细菌检查方法一.药品的微生物限度检查（一）1.口服药物的微生物检查:①大肠杆菌的检查：②细菌总数的检查2.外用药物的微生物检查:①绿脓杆菌的检查：②金黄色葡萄球菌的检查：口服药外用药药品的微生物限度检查实验方法（一）1.药品的预处理2克药品加20毫升生理盐水，研磨制成悬液2.细菌培养外服药口用药药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中药品混悬液10毫升加入亚碲酸钠增菌液中37℃,24小时37℃,24小时将剩余口服药以10-110-210-310-4进行稀释(以生理盐水稀释)3.细菌总数测定加溶

3、化的琼脂培养基中，混匀，冷却后,置37℃恒温培养箱培养24小时 。取三个中试管各管加9ml生理盐水从剩余10ml悬液中取1ml加入第一个稀释管中1ml10-110-410-210-39ml生理盐水从上述三个稀释管中各取1ml1ml10-110-410-210-3二.空气、皮肤细菌检查方法(验证)三.微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备：高压蒸汽灭菌锅消毒煮沸器G6玻璃滤菌器装置洁净工作台移动式紫外光灯鼓风式干烤箱紫外线杀菌标本。厌氧工作站催化剂（钯粒）厌氧培养罐电热恒温培养箱二氧化碳培养箱一、目的要求:1、了解细菌培养接种技术2、掌握细菌基本形态3、掌握药品的微

4、生物学检验程序和方法二、实验内容1.药物的微生物限度检查（二）2.空气、皮肤细菌检查结果测定。3.讲授基础培养基的制备方法（营养琼脂、营养肉汤）。4.培养基的种类和用途普通培养基、营养培养基、厌氧培养基、选择培养基5.细菌在三种不同物理性状培养基上的接种方法(基本技能)液体培养基平板培养基斜面培养基双糖含铁半固体斜面培养基6.显微镜下观察细菌的基本形态:球菌、枯草杆菌、霍乱弧菌。特殊结构：肺炎荚膜、变形鞭毛、破伤风芽胞。实验二药品的微生物限度检查（二）细菌的形态学检查及培养接种技术取出前次实验培养物观察：1.口服药物1)细菌鉴定：在胆盐乳糖增菌液中有无细菌生长

5、：增菌液变混浊―――――有-----接种在伊红美兰琼脂平板培养基上面。方法：分区划线接种。2)细菌总数测定：选择30-300个菌落平板，细菌总数＝菌落数×稀释倍数药物的微生物限度检查方法（二）2.外用药1)判定胆盐乳糖增菌液培养物及亚碲酸钠增菌液培养物有无细菌生长：增菌液变混浊―――有2)细菌鉴定：（1）将胆盐乳糖增菌液培养物无菌接种在16烷三甲基溴化胺琼脂斜面培养基上面。方法：斜面化线接种；（2）将亚碲酸钠增菌液培养物，无菌接种在卵黄高盐琼脂平板培养基上面。方法：分区划线接种。37℃恒温孵育箱24小时培养后，观察结果。分区划线法菌落斜面移种技术菌苔液体移种技

6、术穿刺技术细菌基本形态球菌杆菌螺形菌葡萄球菌链球菌大肠埃希菌枯草杆菌霍乱弧菌细菌特殊结构鞭毛荚膜芽孢破伤风梭菌spore一、目的要求:1、了解细菌的生长现象及代谢产物的观察2、掌握药品的微生物学检验程序和方法二、实验内容1.药物的微生物限度检查（三）2.细菌的生长现象及代谢产物的观察1）液体培养基---沉淀、浑浊、表面生长现象。2）三葡、三链、大肠与副伤乙培养基的菌落特征、溶血环观察。3）双糖含铁培养基---动力、气体、硫化氢、分解乳糖观察。4）结核杆菌菌落的观察。3.中草药、抗生素抑菌试验1）中草药---大蒜汁、黄连、黄芩、黄柏。2）抗生素---青霉素、庆大

7、、氨苄、新诺明、生理盐水。实验三药品的微生物限度检查（三）微生物的形态学检查及药物的敏感性试验1）从伊红美兰琼脂平板培养基上-----挑取黑色带有金属光泽的湿润菌落，接种在普通琼脂斜面培养基上面，进行细菌的纯培养。2）观察外用药物在16烷三甲基溴化胺琼脂斜面培养基上生长状况。记录被检菌色素的溶解性质、液化明胶的状况及菌苔粘稠度等。革兰氏染色镜下观察其菌落形态。根据上述被检菌落的生物性质和状况及细菌形态，确定该被检菌的名称。3）从卵黄高盐琼脂平板培养基上生长，挑取黄色的湿润菌落，接种在普通琼脂斜面培养基上面，进行细菌的纯培养。药物的微生物限度检查（三）2.细菌的

8、生长现象及代谢产物的观察混浊生长菌膜菌