痤疮模型实验设计

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1、实验名称痤疮模型的制作研究实验目的通过药物对实验动物耳部进行刺激，得到痤疮动物模型，进而用于痤疮药物的药效研究。实验原理痤疮是侵犯毛囊皮脂腺单元的一种疾病，在正常的代谢过程中，毛囊皮脂腺导管上皮细胞脱屑，皮脂腺分泌皮脂，皮脂腺携带脱屑从毛囊口排除，其中毛囊可以寄生大量的皮肤正常菌群，例如痤疮丙酸杆菌、需氧葡萄球菌等。不正常的因素导致的性激素紊乱和皮脂腺痤疮丙酸杆菌大量繁殖、皮脂腺导管的异常角化、皮脂的大量分泌导致了痤疮的产生。目前，应用于痤疮模型的动物主要有家兔和大鼠，其中兔耳模型是最常用的痤疮药物抗角化实验模型，该模

2、型是进行寻常痤疮研究的合适动物模型。大鼠模型主要用来研究痤疮的炎症发病机制，并且可以鉴定抗痤疮药物的抗菌疗效。实验方案一（兔耳模型）实验动物雄性大白兔30只，体重2kg-2.5kg试剂煤焦油，纯度为50％，用95％酒精配制成浓度为2％的煤焦油溶液，硫磺粉刺洗剂实验方法1.将30只大白兔随机分成实验组（22只）和实验对照组（8只）2.于实验组每只兔耳内侧面耳导管开口处约2cm×2cm范围，每日涂2％煤焦油溶液1次，每次约涂1—0．5ml，连续2周以制作动物痤疮模型。正常对照组未作任何处理以作对照3.造模成功后，将实验组2

3、2只白兔再次以重量随机分为3组，即给药组(8只)、硫磺粉刺洗剂组(7只)和生理盐水组(7只）其中硫磺粉刺洗剂组为阳性对照组，生理盐水组为阴性对照组。于兔的右耳(即未取标本侧)涂煤焦油处分别用实验药物、硫磺粉刺洗剂、生理盐水薄薄涂一层，不见颜色为佳，每天1次，每次约0．5ml，连续3周，观察组织变化。预期实验结果实验组兔耳涂药1周后，耳部皮肤增厚、变硬，毛孔变粗大，可见白头粉刺及黑色角栓；涂药2周，可见涂药处毛孔变得更粗大，其毛囊口处见明显黑色角栓，呈黑头粉刺状，同时毛囊口隆起可见较多红色丘疹及少许脓疱，整个兔耳表面粗糙

4、，按痤疮分类属轻到中度(I一Ⅱ级)。而正常兔耳(即对照组)菲薄、柔软，其上毛囊口排列整齐，未见粉刺、丘疹及脓疱等。痤疮模型制造成功以三度Ⅳ级法为标准1.轻度(I级)——粉刺为主要的皮损，可有少量丘疹和脓疱，总病灶数少于30个。2.中度(Ⅱ～Ⅲ级)——其中Ⅱ级有粉刺，伴有中等量的丘疹和脓疱，总病灶数在31～50个之间；Ⅲ级有粉刺，伴有大量丘疹和脓疱，偶见大的炎性损害，分布广泛，总病灶数在51～100个之间，有少数结节。3.重度(IV级)——除上述皮疹外，还伴有3个以上结节与囊肿。实验方案二（大鼠模型）实验动物Wister

5、大鼠60只体重200g左右实验试剂丙酸杆菌溶液(丙酸杆菌备用液：冻干丙酸杆菌在厌氧条件下以硫乙醇钠液培养基增菌后，用生理盐水洗涤3次，调整丙酸杆菌浓度为6OOO万/ml，95℃水浴灭活15min后备用)，生理盐水。实验仪器千分尺实验方法1．大鼠60只，随机分成6组，每组10只，正常组，模型组，阳性药组，实验药物大中小剂量三组。2．将大鼠麻醉后，正常组注射生理盐水50ul/200g，其余各组大鼠耳廓皮内注射丙酸杆菌菌液50ul/200g，，并在注射处做标记，于制备第2天，从各组随机抽取一只，用无菌针头挑取耳廓肿胀部位，涂

6、皿，厌氧罐中培养48h，证明为痤疮丙酸杆菌感染。注射后，每隔4小时测量1次大鼠耳廓厚度，连续5d，计算各鼠耳廓肿胀率。耳廓肿胀率(％)=(注射后耳廓厚度一注射前耳廓厚度)／注射前耳廓厚度x100％，观察大鼠耳廓结构变化。3.造模成功后，各组分别给药连续12天，末次药物治疗给药后18h将大鼠处死，取有标记处的左右耳片，置于10％甲醛液中固定，石蜡包埋、切片、,HE紫色,在50×,100×,200×,400×，光镜下观察光镜下观察组织学改变。预期实验结果造模各组皮下均有多个脓肿形成．炎细胞弥漫性浸润以大量嗜中性白细胞为主，

7、部分为单核及淋巴细胞，周围组织毛细血管扩张、充血、渗出，组织水肿明显，肌肉变性断裂，肌间隙及肌层中炎细胞漫润等，证明痤疮模型成功。存在问题由于痤疮发病机制的复杂性，单一从一方面模仿痤疮的模型可能不能满足实验的需要。