β-乳球蛋白修饰.doc

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1、β-乳球蛋白修饰将3-羟基-邻苯二甲酸酐HP溶于二甲基亚飒DMSO中，得到饱和的HP溶液；将β-乳球蛋白β-LG溶于pH8.5，0.1M磷酸钠溶液中，得到蛋白终浓度为20mg/mL的蛋白溶液；再将上述HP溶液分为五等份，每12min加入蛋白溶液中，震荡混匀，1MNaOH调节pH为8.5，酸酐在反应体系中的终浓度为60mM，在温度为25℃的条件下，放置l小时，pH7.4PBS透析，再用0.45uM微孔滤膜过滤除菌，4℃保存，即得成品。3-羟基-邻苯二甲酸酐修饰乳清蛋白南方医科大学学报第31卷P1176乳清蛋白（OVA），3-羟基-邻苯二甲酸

2、酐HP，二甲基亚飒DMSOHP-OVA的制备（化学修饰）配制20mg/ml的OVA溶液（pH8.50.1mol/L的磷酸钠溶液），将饱和的3-羟基-邻苯二甲酸酐HP溶液分成5等分，每间隔12分钟加入OVA中，振荡混匀，滴加1MNaOH调节溶液维持pH为8.5，置室温1小时，然后pH7.4PBS透析，再用0.45uM微孔滤膜过滤除菌，4℃保存，即得成品。专利修饰种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，包括以下步骤：将3-羟基-邻苯二甲酸酐（3-hydroxyphthalicanhydride，缩写HP）溶于二甲基亚飒DMSO中，得

3、到饱和的HP溶液；将β-乳球蛋白β-LG溶于pH8.5，0.1M磷酸钠（应该是磷酸盐缓冲液）溶液中，得到蛋白终浓度为20mg/mL的蛋白溶液；再将上述HP溶液分为五等份，每12min加入蛋白溶液中，震荡混匀，每次加完后用1M NaOH调节pH为8.5，酸酐在反应体系中的终浓度为60mM，在温度为25℃的条件下，放置l小时，pH7.4 磷酸缓冲溶液PBS在4度透析过夜，再用0.45uM微孔滤膜过滤除菌，4℃保存，即可制得成品。1.一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，其特征是包括以下步骤：将3-羟基-邻苯二甲酸酐HP溶于二甲基

4、亚飒DMSO中，得到饱和的HP溶液；将β-乳球蛋白β-LG溶于pH8.5，0.1M磷酸钠溶液中，得到蛋白终浓度为20mg/mL的蛋白溶液；再将上述HP溶液分为五等份，每12min加入蛋白溶液中，震荡混匀，1M NaOH调节pH为8.5，酸酐在反应体系中的终浓度为60mM，在温度为25℃的条件下，放置l小时，pH7.4 PBS透析，再用0.45uM微孔滤膜过滤除菌，4℃保存，即可按照常规方法制成各种剂型的成品。2.根据权利要求1所述的一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，其特征是所述的β-乳球蛋白从牛奶中分离及纯化得到。3.根

5、据权利要求1所述的一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，其特征是所述的β-乳球蛋白用鸡血清蛋白OVA、兔血清蛋白RSA、猪血清白蛋白PSA、冷水鱼皮明胶G-FS、猪皮明胶G-PS代替。4.根据权利要求1或2所述的一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，其特征是所述的3-羟基-邻苯二甲酸酐用3-羟基-邻苯二甲酸酐的衍生物、琥珀酸酐、马来酸酐代替。5.根据权利要求1或2所述的一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，其特征是所述的剂型为凝胶制剂、膏霜剂、喷雾剂、搽洗剂、盥洗剂。Chemicalmodific

6、ationofB-LG.B-LG(111.1or11.1uMin0.1MphosphatepH8.5)wastreatedwith3HP(1.19Mindimethylformamide),addedinfivealiquots(finalconcentration,60mM)in12-minintervalsandthepHwasmaintainedat8.5.Themixture(10ml)waskeptforanother1hat25℃,dialyzedagainst4Iof0.15MNaCl,10mMphosphate,pH7.4

7、(PBS)overnight,redialyzedfor4hwithfreshbuffer,andfilteredthrough0.45-umsyringefilters.2,4,6-trinitrobenzenesulfonicacid(TNBS)(28.4mM)wascarriedoutatpH9.0inphosphatebufferfor3hat25℃.ProteinconcentrationweredeterminedusingtheBCAProteinAssayReagentToquantitatelysineintheorig

8、inalandthechemicallymodifiedpreparation,theyweretreatmentwithTNBSanddialyzedagainst0.1MNaHSO3.Th