精液稀释液配制及精液稀释.doc

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1、精液稀释液配制及精液稀释一、实验目的掌握稀释配制的基本程序和操作方法。二、实验材料主要用品：250ml三角瓶、250ml烧杯、100ml量筒、感量为0.1克的天平、玻璃漏斗、电炉、石棉网、玻璃棒、定性滤纸、消毒纸巾、硫酸纸、灭菌牛皮纸、橡皮筋、10ml一次性注射器、1ml注射器、5ml注射器、鸡蛋、75%酒精棉球、葡萄糖、柠檬酸钠、青霉素、链霉素三、实验内容1．玻璃用品的清洗与消毒：将所有玻璃用品用洗涤剂洗净，用稀盐酸浸泡并用自来水冲洗干净后，用蒸馏水冲洗四遍，空干水分，用纸将瓶口包好，放入120℃干燥箱中干燥1h，放凉备用。2．天平的标准：用

2、两张圆形硫酸纸放在天平的左右托盘上，校准天平。3．称量药品：称取配方需要量的药品，并放入大烧杯中4．溶液配制：用量筒量取双蒸水100ml，加入烧杯中，用磁力搅拌器或玻璃棒搅拌使其溶解。5．用一层定性滤纸过滤溶液至三角瓶中6．在三角瓶上加牛皮纸盖并橡皮筋固定，放在盖有石棉网的电炉上加热至沸腾，迅速将其取下，放凉。制成基础液。基础液如果不马上使用可放入在2～5℃冰箱中备用，保存时间不超过12h。7．取卵黄液：新鲜鸡蛋用75%的酒精棉球消毒外壳，待其完全挥发后，将鸡蛋磕开，分离蛋清、蛋黄和系带，将蛋黄盛于鸡蛋壳小头的半个蛋壳内，并小心地将蛋黄倒在用四

3、层对折（8层）的消毒纸巾上。小心地使蛋黄在纸巾上滚动，使其表面的稀蛋清被纸巾吸附。先用针头小心将卵黄膜挑一个小口，再用去掉针头的10ml的一次性注射器，从小口慢慢吸取卵黄，尽量避免将气泡吸入，同时应避免吸入卵黄膜。吸入10ml后。再用同样的方法吸取另一个鸡蛋的卵黄。也可将卵黄移至纸巾的边缘，用针头挑一个小口，将卵黄液缓缓倒入量筒中，注意避免将卵黄膜倒入量筒中。羊精液稀释液推荐配方：低温（2～5℃）保存液冷冻保存液基础液葡萄糖（一水）3.3g8.8柠檬酸钠（二水）1.4g～双蒸馏水100ml100ml低温保存或第一液基础液80ml80ml卵黄20

4、ml20ml第二液第一液47ml甘油3ml牛精液冷冻精液稀释液推荐配方举例：细管冷冻精液稀释液配方11%乳糖或12%蔗糖73ml卵黄20ml甘油7ml青霉素10万单位链霉素10万单位8．卵黄液与基础液的混合：取80ml放凉的基础液，加入三角瓶中，然后将卵黄液注入或将卵黄液从量筒中倒入三角瓶中，将量取的80ml基础液反复冲洗量筒中的卵黄，使其全部溶解入基础液中，然后将全部的基础液倒入三角瓶中。摇匀。9．加入抗生素：分别用1ml注射器吸取基础液1ml，分别注入80万单位和100万单位的青霉素和链霉素瓶中，使其彻底溶解。分别从青霉素瓶中吸取0.1～0

5、.12ml和链霉素瓶中吸取0.1ml，将其注入三角瓶中，并摇匀。另一种方法是，是称取0.1克的青霉素和0.1克的链霉素加入三角瓶中，摇匀。用基础液、卵黄液和抗生素混合制成第一液。10．第二液的制作：用量筒量取第一液47ml，加入另一只三角瓶中，用注射器吸取3ml消毒甘油，注入三角瓶中，摇匀。制成羊冷冻精液的第二液。四、作业简述基础液、低温保存稀释液、冷冻保存稀释液的制作方法。注：猪稀释液配方：1、稀释液配制稀释液配方：12%蔗糖溶液 75ml 氨基乙酸        0.5g          柠檬酸钠   0.5g Tris         

6、  0.2g          卵黄       20ml双重蒸馏水加至  100ml          甘油最终浓度 1%     青链霉素  500-1000μg/ml甘油配制12%蔗糖溶液，并加入氨基乙酸，柠檬酸钠和Tris后过滤煮沸15分钟消毒，待凉后按比例加入卵黄、甘油、青链霉素，充分搅拌均匀。2、解冻稀释液的配制解冻稀释液配方：葡萄糖  5g    双蒸水     100ml             柠檬酸钠 0.5g  10%安钠加  5ml配好后过滤煮沸消毒