实验九LB琼脂平板培养大肠杆菌.doc

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1、实验九LB琼脂平板培养转化的大肠杆菌一、实验目的1、学会LB琼脂平板的制备。2、掌握筛选阳性转化产物的方法。二、实验原理LB培养基，是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌，分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的LB培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。载体上携带有抗氨苄青霉素（Amp）的标记基因，目的DNA和大肠杆菌自身都没有抗Amp的基因。将目的DNA与载体连接后，转化至大肠杆菌上，再将转化产物涂抹在含有Amp的LB培养基上培养，可以大量繁殖（克隆）目的DNA片段。三、实验仪器及药品耗材1、主要仪器：超纯水仪、电子天平、水浴

2、锅、灭菌锅、移液器、超净工作台，恒温培养箱等。2、主要药品及耗材：50mg/ml氨苄青霉素、蛋白胨、酵母、琼脂粉、Nacl、转化后复苏的菌液、无水乙醇、一次性手套、移液器吸头、塑料封口膜、美国进口封口胶、称量纸、烧杯、培养皿、涂布棒、剪刀等。四、实验步骤1、LB培养基制备（100ml）：胰化蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，Nacl1g，琼脂粉1.4g，加蒸馏水定容至100ml，将培养基溶解后于121℃灭菌25分钟。在超净工作台内，待培养基冷却到一定程度，加入100ul50mg/ml氨苄青霉素（Amp），混匀后倒入培养皿，至LB培养基冷却凝固。2、涂菌：将转化后

3、复苏的菌液3500rpm离心3min，去500μl上清液，吸取100μl菌液到AmpLB固体培养基上，用无菌的涂布棒将菌液均匀地涂开直至干燥（可以根据培养后菌落的多少适当调整涂板的菌液量）。3、培养：将涂菌后的LB平板用封口胶密封，倒置于恒温培养箱中37℃过夜培养12～16个小时。一、作业记录实验现象。