细菌详细裂解步骤.doc

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1、超声——酶解法1细菌培养及收集活化细菌，LB固体培养基活化培养24h，挑取单菌落接种液体培养基12h，收集菌悬液，4℃12000g离心10min，弃上清液，细菌沉淀悬于生理盐水中，于600nm波长处测定其吸光度值（A600），调整菌悬液吸光度A600=0.52，浓缩10,20，30，40倍后将菌悬液分装于离心管中，每管1mL，4℃12000g离心10min，弃上清液，细菌沉淀于-20℃保存备用2超声波破碎菌体取保存的细菌沉淀，用生理盐水清洗2-3次，取菌悬液1ml，加入20ul溶菌酶（50mg／ml），37℃水浴锅恒温反应一小时，采用超声

2、法裂解细菌，超声功率300~350W，工作9.9s，间歇9.9s，循环152次，冰浴。超声结束后立即取10μL菌悬液，涂片进行革兰染色，显微镜下观察细菌破碎程度。3提取菌悬液蛋白剩余菌悬液于4℃16060g离心10min，收集上清液。Tris-Hcl0.01molLPH7.4柠檬酸20mMMnSO430mMNADP20mM溶菌酶50mgml