原位杂交实验方法.ppt

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1、原位杂交实验方法1mRNA原位杂交前实验准备1,无RNA酶水的处理2,无RNA酶载玻片的处理3,标本的防RNA酶的固定4,探针的稀释和保存5,DNA探针需变性2原位杂交溶液的配制1,预杂交液和杂交液的配制2,20Xssc,2Xssc,0.2Xssc缓冲液的配制3,0.1molPBS缓冲液的配制4,0.1mol枸橼酸缓冲液的配制5,0.1molTBS缓冲液的配制6,复合消化液的配制7,组织细胞打孔液的配制8,杂交漂洗液9,过氧化氢封闭液3探针设计方案1,探针名称:2,适用种属:3,标记方式:3ˋDIG5ˋFAM4,模板序列:5,探针序列:4探针杂交原理1,

2、组织细胞的通透2,探针长度3,探针浓度和杂交时间4,杂交中的Tm值和杂交温度5,杂交严格度6,预杂交原理7,杂交后处理5A-石蜡切片mRNA原位杂交步骤一,过氧化物酶显色系统二,碱性磷酸酶显色系统三,荧光显色方法6B-冰冻切片mRNA原位杂交步骤一,过氧化物酶显色系统二,碱性磷酸酶显色系统三,荧光显色方法7C-细胞爬片或涂片mRNA原位杂交步骤一,过氧化物酶显色系统二,碱性磷酸酶显色系统三,荧光显色方法8附录1,DAB的配制和使用方法2NBT/BCIP的配制和使用方法3,苏木素的配制和使用方法4,核固红的配制和使用方法9流式细胞仪D-悬浮细胞的mRNA原

3、位杂交细胞流式细胞仪步骤10

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