局麻药抑制中性粒细胞释放氧自由基作用及其机制的研究

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1、局麻药抑制中性粒细胞释放氧自由基作用及其机制的研究作者：黄科昌张鹏高　尔摘要目的：局麻药除具有神经传导阻滞作用外，还有一定的抗炎作用。但这种抗炎作用究竟与局麻药的哪些药理特性有关仍有争议。本文目的是研究局麻药对中性粒细胞释放氧自由基功能的抑制作用，探讨其可能的机制。方法：选取近2周未用过药物的健康志愿者12人。抽取静脉血18ml，肝素化全血以1200r/min离心10min，取白细胞层，以Hank’s平衡液对倍稀释，与淋巴细胞分离液共同分层置入试管中，2000r/min水平离心20min，弃血浆层、单核细胞层和分离液层，留下的即为中性粒细胞和残存的红

2、细胞。然后加入相当于细胞团块9倍体积的0℃红细胞裂解液混匀后在0℃静置７min，这一过程可裂解残存的红细胞，1500r/min离心10min后，残存的即为中性粒细胞。然后以Hank’s平衡液水洗3遍，每次水洗完，都以1500r/min离心，再以5mlHank’s平衡液悬浮，用细胞计数器计数，根据结果将细胞悬液以Hank’s平衡液稀释至5×106个／ml。经染色证实中性粒细胞纯度大于95%,台盼蓝染色证实存活率大于98%。　以细胞色素C减少法测定活化的中性粒细胞产生的细胞外超氧阴离子（O2-）。反应混合物由1.4ml缓冲液、0.4ml中性粒细胞悬液、0

3、.2ml细胞色素C（3.7mg/ml）和过氧化氢酶（0.14mg/ml）组成，共2ml，盛于试管中。参考样品混合物以同样方法准备，并加入10µl超氧化物岐化酶（SOD,1×10-2M）。以趋化寡肽（fMLP）或佛波醇（PMA）激活反应，在550nm波处测吸光度。参考样品的吸光度在混合后立即测定。实验组吸光度减去参考样组吸光度即得依赖于O2-的细胞色素C减少值，以表示中性粒细胞O2-的释放。在加入各种激活剂前，先加入局麻药，在37℃孵育60min。在加入fMLP前，先加入血小板活化因子预激5min。结果：三种不同浓度的利多卡因1×10-4M

4、，1×10-5M和1×10-6M，对中性粒细胞释放O2-的抑制分别是对照值的67.1±5.7%，73.4±3.9%和85.7±6.2%，三组间有显著性差异（P<0.01）。浓度为1×10-4M的罗哌卡因、左旋布比卡因、布比卡因和地卡因对中性粒细胞释放O2-的抑制率分别是对照值的77.5±4.7%，75.8±6.4%，88.3±7.3%，61.3±5.1%，罗哌卡因和左旋布比卡因，组间比较无显著性差异；左旋布比卡因组和布比卡因组的差异有显著性（P<0.01）；罗哌卡因、布比卡因和地卡因三组间两两比较，差异有显著性（P<0.01）。单纯PMA组和PMA+

5、地卡因组产生的O2-量分别为15.2±0.8nmol/106个和14.7±0.5nmol/106个，两组间无显著性差异。结论：局麻药对活化的中性粒细胞释放氧自由基有抑制作用，且呈浓度依赖性，随浓度的增加，抑制作用增强；局麻药对活化的中性粒细胞释放氧自由基的抑制与局麻药的立体异构有关，与消旋体相比，左旋布比卡因的抑制作用较强；左旋布比卡因与罗哌卡因的作用相当，二者之间无显著性差异；脂溶性较强的地卡因，抑制作用最强；局麻药对中性粒细胞氧自由基作用的位点在蛋白激酶C上游。关键词：局麻药　中性粒细胞　氧自由基　超氧阴离