公共卫生微生物采样、检测方法总结.doc

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1、一、空气中微生物的检测方法------细菌总数（营养琼脂，121℃高压灭菌20min，培养时间37℃,48h）1.两种方法（1）撞击法(二级或者六级微生物采样器)（2）自然沉降法（暴露5min）采样：梅花布点，高度：1.2~1.5m；离墙：1m。二、茶具微生物检验方法（一）细菌总数1、生理盐水的制法：将氯化钠（8.5g）溶解于蒸馏水（1000mL）中，分装到试管内，每管10mL，121℃高压灭菌20min。2、采样：棉拭子湿润生理盐水，在茶具内、外缘涂抹50cm2，即口唇接触处一圈（1~1.5cm），用灭菌剪刀剪去棉签手接触处，将棉拭子放入10mL生理盐水中，4h内送检。3、检验

2、程序：检样→各1mL加入两块灭菌平皿（若污染严重，可十倍递增稀释）→37℃，48h培养→菌落计数→报告4、单位：cfu/cm2。（二）大肠菌群1、培养基：乳糖胆盐发酵培养液（双料的，每管10mL，115℃高压灭菌15min）2、检测方法：发酵法（具体内容课本11页）3、检样（测定细菌总数余下的样品）4、革兰氏染色过程：（阳性菌显紫色，阴性菌显红色）（1）初染：1min，水洗；（2）碘染：1min，水洗；（3）脱色：30s，水洗；（4）复染：1min，水洗，待干，镜检。5、结果报告：凡乳糖发酵管最终产酸产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告检出大肠菌群。三、毛巾、床上卧具微生

3、物检测方法（一）细菌总数1.采样（1）毛巾、枕巾：对折后两面的中央各25cm2；（2）床单、被单：在上下两部中央25cm2来回涂抹；2、检测程序同茶具细菌总数检测3.计算单位：cfu/25cm2。(二)大肠菌群（检测程序同茶具大肠菌群检测）1.涂抹法：（用测定细菌总数时采集的样品）四、理发用具微生物检验方法（一）大肠菌群1、采样推子：在推子前部上下部分均匀各涂抹三次；理发刀、剪和修脚工具：在使用的刀、剪面的两侧各涂抹一次采样；两个刀或者两个剪为一份样品。2、检样5mL倒入双料乳糖胆盐发酵管，37℃，24h培养；3、分离培养：接种伊红美蓝平板，做革兰氏染色镜检；4、证实试验：接种乳

4、糖发酵管37℃，24h培养，观察产气情况。5、结果报告：乳糖管最终产酸产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，可报告为大肠菌群阳性。（二）金黄色葡萄球菌1、培养基：7.5%的氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤培养基2、步骤：（1）做大肠菌群剩余的5mL倒入培养基中，37℃，24h培养；（2）接种血平板，37℃，24h培养；观察形状：圆形、金黄色、凸起、表面光滑、周围有溶血圈；（3）挑菌落做镜检：革兰氏阳性（红色），葡萄状排列；（1）甘露醇发酵试验：接种到甘露醇发酵培养基中，37℃，24h培养，观察是否产酸；（2）血浆凝固酶试验玻片法：在干净的玻片两边，一端滴一滴生理盐水，一端滴一滴血浆，接种

5、环挑菌落分别与它们混合。5min后均无凝固现象的为阴性；若血浆中出现颗粒状凝块而生理盐水中没有，则为阳性。五、拖鞋微生物检验方法霉菌与酵母菌（生理盐水中要加入玻璃珠）1.培养基：霉菌培养基、（虎红）孟加拉红培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）2.取样：有棉拭子在每只拖鞋鞋面与脚趾接触处的5cm×5cm面积上均匀涂抹3次，一双拖鞋为一份样品；3.将盛有棉拭子的试管在手心用力振荡100次，使霉菌孢子分开；4.培养：在霉菌培养箱中25~28℃，培养观察一周。5.单位是cfu/50cm2。六、浴盆、脸（脚）盆微生物检测（一）细菌总数无菌生理盐水：分装125mL/瓶供浴盆采样；50mL

6、供脸（脚）盆采样。采样部位：在盆内侧二分之一到三分之一高度；布点：浴盆梅花布点；脸（脚）盆相对两侧壁布点；方法：涂抹法（与茶具方法一致）单位：cfu/25cm2。（二）大肠菌群(同茶具)七、游泳池水微生物检测（一）、细菌总数1.采样瓶：无酸、无碱、无毒的玻璃容器。2.灭菌前要加入足量的10%的硫代硫酸钠溶液，一般125mL水样加0.1mL。3.采样面积，㎡成人池天然游泳池游泳池水儿童池≦1000>1000≦2500>2500采样点数1~2235>5注：在水面下30cm处取水样450mL4.操作步骤（与茶具细菌总数一样）（一）大肠菌群1.培养基：三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液（蒸馏水量不

7、变，其他成分三倍）2.步骤（1）推测性试验2个装有50mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管内（装有小试管）各加入100mL的水样；在10支装有5mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管里（装有小试管）加入10mL水样。摇匀，培养。（2）平板分离接种伊红美蓝，培养、观察；典型菌落形态：黑紫色或红紫色，具有金属光泽。（3）复发酵试验进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，培养，观察。（4）查表：1000mL水样中大肠菌群的MPN值。八、生活饮用水微生物检验方法（一）采样1.采样容器应采用洁净、