第四节生物样品分析方法的基本要求在测定生物样品中药物ppt课件.ppt

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1、第四节生物样品分析方法的基本要求在测定生物样品中药物及其代谢物时，一般要在测定前进行样品的前处理，即进行分离、纯化、浓集。一、常用品种的种类、采集和贮藏生物样品包括各种体液和组织，常用是血液（血浆、血清、全血）、尿液、唾液。（一）血样血浆（plasma)和血清（serum)是最常用的生物样品。测定血中药物浓度通常是指测定血浆或血清中的药物浓度，而不是指含有血细胞的全血中的药物浓度。一般认为，当药物在体内达到稳定状态时，血浆中药物浓度与药物在作用点的浓度紧密相关，即血浆中的药物浓度反映了药物在体内（靶器官）的状况，因而血浆浓度可作为作用部位药物浓度的可靠指标。1.取样：

2、供测定的血样应能代表整个血药浓度，因而应待药物在血液中分布均匀后取样。动物实验时，可直接从动脉或心脏取血。对于病人，通常采取静脉血，有时根据血药浓度和分析方法灵敏度。也可用毛细管采血。2.制备：血浆的制备将采取的血液置含有抗凝剂（如：肝素、草酸盐等）的试管中，混合后，离心，分离血细胞，上清液即为血浆。肝素是一种含硫酸盐的粘多糖，常用其钠盐、钾盐，它能阻止凝血酶原转化为凝血酶，从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白。一般lml的全血需加0.1—0.2mg的肝素，加入血样后立即轻轻旋摇，但勿太猛烈，以免导致血细胞破裂。血清的制备血清是由血液中纤维蛋白原等影响下，引起血液凝结而析出的澄清

3、黄色液体，经离心其量约为全血量的30％一50％。在室温高时，血凝过程进行得很快，宜在血凝后半小时内分离血清。当室温低时，血凝过程较慢，可将血液置37℃温度下加速血清析出。血浆及血清中的药物浓度测定值通常是相同的。全血也应加入抗凝剂混匀，防止凝血。对大多数药物来说血浆浓度与红细胞中的浓度成正比，所以测定全血也不能提供更多的数据。由于全血的净化较血浆和血清麻烦，特别是溶血后，血色素等可能会给测定带来影响。3.特点：血样的采取量受到限制、间隔时间，采集方法：一般取1ml—2m1。用注射器、毛细管或微量采血管采取。血样的采血时间间隔应随测定目的的不同而异。采取血样后，应及时分离血浆

4、或血清，并立即进行分析。如不能立即测定时，应完全密塞后保存，短期冷藏（4℃），长期冷冻（-20℃）保存。（二）唾液唾液的采集应尽可能在刺激少的安静状态下进行。一般在漱口后15min收集。采集后立即测量其除去泡沫部分的体积。放置后分为泡沫部分、透明部分及灰乳白色沉淀部分三层。分层后离心分离，取上清液作为药物浓度测定的样品。可集中、单一部位采集。唾液中含有粘蛋白，为阻止粘蛋白的生成，应将唾液在4℃以下保存，解冻后搅匀后再用，否则会产生误差。优点：可以不受时间和地点的限制，很容易地反复采集，采集时无痛苦无危险；有些唾液中药物浓度可以反映血浆中游离型药物浓度。缺点：唾液是各腺体

5、分泌的的混合液体，其组成发生经时变动；因此，唾液中的药物浓度与血浆中的游离型药物浓度相比就容易变动；唾液中药物浓度与血浆中药物浓度的比值(S/P)只有少数药物是恒定值；有些与蛋白结合率较高的药物，药物在唾液中的浓度比血浆浓度低得多，需要高灵敏度的分析方法才能检测；对有些患者（如癫痛二昏迷）不能采集唾液样品。（三）尿液尿药测定主要用于药物剂量回收研究、尿清除率、生物利用度的研究。体内药物清除主要是通过尿液排出，药物可以原型（母体药物）或代谢物及其缀合物（conjugates）等形式排出。尿液主要成分是水、含氮化合物（其中大部分是尿素）及盐类。尿液中药物浓度较高，收集量可

6、以很大，也方便，但尿液浓度通常变化较大，应测定一定时间内排入尿中药物的总量，这就需要测定在规定时间内的尿液体积及尿药浓度，时间尿以外的尿不可能推断全尿中药物的排泄浓度和药物总量。测定尿中药物的总量时，将一定时间内（如8h;12h或24h等）排泄的尿液全部储存起来，并记录其体积，取其一部分测定药物浓度，然后乘以尿量求得排泄总量。采集的尿液时，需用量筒准确地测量储尿量，并做好记录。缺点：尿液中药物浓度与血药浓度相关性差；受试者的肾功能正常与否直接影响药物排泄，因而肾功能不良者不宜采集尿样；婴儿的排尿时间难于掌握；尿液不易采集完全并不易保存。采集的尿样应立即侧定。若收集24h的尿液不

7、能立即测定时，应加入防腐剂置冰箱中保存。常用防腐剂有：甲苯等，短时冷藏；长时冷冻。二生物样品分析其前处理技术主要应考虑生物样品的种类，被测定药物的性质和测定方法三个方面的问题。样品的分离、纯化技术应该依据生物样品的类型。例如，血浆或血清需除蛋白，使药物从蛋白结合物中释出；唾液样品则主要采用离心沉淀除去粘蛋白；尿液样品常采用酸或酶水解使药物从缀合物中释出。根据被测定药物的结构、理化性质及药理性质、存在形式、浓度范围等，采取相应的前处理方法。87页图4-4大致反映了检测方法与样品