选修1 22土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt课件.ppt

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1、选择培养基和鉴别培养基。上节课我们学习了培养基的配置以及接种技术，按功能分，培养基可分为哪几种？土壤中分解尿素的细菌的分离与计数专题2微生物的培养与应用请大家带着这些问题先阅读课本课题背景：1.尿素是如何利用的？2细菌能利用尿素的原因？3本课题研究的目的？尿素是一种重要的氮肥，农作物（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为，这是因为细菌能合成。脲酶不能氨和CO2一、研究思路1、TaqDNA聚合酶的筛选及提示2、实验室微生物的筛选原理（P21）3、选择培养基（一）筛选菌株人为提供有利于目的菌

2、株的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。（阅读配方）能分解尿素的细菌的筛选阅读教材22页第一大段相关内容，并思考回答下列问题：1.在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是是什么物质？碳源是葡萄糖，氮源是尿素。2.分析该配方的培养基对微生物是否具有筛选作用？如果有，又是如何进行筛选的？有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。答：不

3、一定，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能够在选择培养基上生长的微生物不一定是所需要的微生物，还需要进一步的验证。？3.只要能够在选择培养基上生长的微生物是否就是所需要的微生物？统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，。因此，是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在的平板进行计数。（二）统计菌落数目来源于样品稀释液中的一个活菌恰当的稀释度30～3001.间接计数法（稀释涂布平板法）思考题1.想

4、一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。〖思考4〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是。=(C÷V)×M=（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数微生物数量测定方法1、稀释涂布平板法——间接技术方法（注：菌落数往往比活菌数）2、显微镜计数——直接计数少实例分析第一同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，

5、但是其中1个平板的计数结果与2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。实例启示1、在实验设计时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力和准确性2、在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。（三）设置对照）1、设置对照的目的排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。2、对照实验概念指除了的条件外，其他条件都的实验。没做处理的称为，做处理的称为组。资料分析被测试相同对照组

6、实验A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。一是由于土样不同；二是由于培养基污染或操作失误。另一种方案：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。实验方案有两种一种方案：可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的!四、实验设计实验的具体操作步骤如下:资料一.1.土壤

7、取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。实验名称：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（实验案例）……在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。2.制备培养基：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。资料二.3.样品的稀释将10g土样加入盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶中，充分摇匀，吸取上清液1mL，转移至盛有9mL的生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至107稀释度，

8、并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。资料二.样品的稀释由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103～107。为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？答：这是因为土壤中各类微生物的数量是不