土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt课件.ppt

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1、课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题背景1、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)脲酶+CO2NH3+H2O3、课题目的①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌一.研究思路㈠.筛选菌株㈡.统计菌落数目㈢.设置对照㈠.筛选菌株菌株：纯且活状态所保存的菌种。菌株又称品系,表示任何由一个独立分离的单细胞(或单个病毒粒子)繁殖而成的纯种群体及其后代。1、实例：DN

2、A多聚酶链式反应(PCR)是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。㈠.筛选菌株提出的问题—如何寻找耐高温的酶？解决问题的思路—寻找耐高温环境；启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。原理—高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌，用耐高温菌种提取耐高温酶。2、实验室中微生物的筛选原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。什么是选择性培养基？允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。菌株：纯且活状

3、态所保存的菌种。菌株又称品系,表示任何由一个独立分离的单细胞(或单个病毒粒子)繁殖而成的纯种群体及其后代。选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。选择培养基实例：加入青霉素的培养基:加入高浓度食盐的培养基:不加氮源的无氮培养基:不加含碳有机物的无碳培养基:加入四环素等抗生素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离金黄色葡萄球菌分离自养型微生物分离导入了目的基因的受体细胞分离固氮菌1.使用选择培养基的目的是（　）A.培养细菌B.培养真菌C.使需要的微生物大量繁殖D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别

4、C练习鉴别培养基用于鉴别不同类型微生物的培养基。在培养基中加入某种特殊的化学物质，某种微生物在培养基中生长后能产生某种代谢产物，而这种代谢产物可以与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征性变化，根据这种特征性变化，可将该种微生物与其他微生物区分开来。伊红—美蓝培养基常用来鉴别大肠杆菌大肠杆菌代谢产生的有机酸，和伊红-美蓝反应使菌落呈深紫色，且有金属光泽。15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、本课题所使用培养基：①从物理性质看此培养基属于哪类？固体

5、培养基②该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？③此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。④怎样证明此培养基具有选择性呢？实验组对照组培养基类型是否接种目的结果以尿素为唯一氮源的培养基牛肉膏蛋白胨培养基是是分离尿素细菌判断该培养基有无选择性只生长尿素细菌生长多种微生物1、显微镜直接计数：利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。㈡.统计菌落数目：练习2、取少量酵母菌放入血球计数板直接记数，测得的数目是A、活细胞数B、死细胞

6、数C、菌落数D、细胞总数不能区分死菌与活菌；不适合对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；不能做出较为宏观、全面的反映缺点优点：直观、快速设备简单、能观察微生物的形态特征2.间接计数法（活菌计数法）⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个活菌繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个活菌。⑵常用方法：稀释涂布平板法每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。注意事项①为了保证结果准确，一般

7、选择菌落数在30—300的平板上进行计数。②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的培养皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。例：P22你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？甲：没有重复实验，不具说服力（至少涂布3个平板）乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值?设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。㈢.设置对照：实例：P23原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质)方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验结

8、果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。方