重组DNA技术和基因组学ppt课件.ppt

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1、第六章重组DNA技术和基因组学第一节DNA克隆基础DNA克隆所谓克隆是产生一个一模一样的拷贝（复本）。DNA克隆是从一个较大的染色体分离一个基因或DNA片段，并把它嫁接到小分子DNA载体上，然后把它送入细胞，通过千百万次地增殖细胞数量，同时扩增每个细胞中克隆DNA的拷贝数，达到选择性地扩增某一个基因或DNA片段的方法。从克隆任何一种生物DNA涉及下列过程1.使用限制性内切酶这种分子剪刀在精确位点切割DNA；2.选择一种能够自我复制小分子DNA作为克隆载体（cloningvectors），通常是质粒或病毒DNA；3.使用DNA连接酶共价连接待

2、克隆的DNA片段和线性化载体DNA，产生不同来源DNA组成的“重组DNA分子”（recombinantDNAs）；4.把重组DNA分子转入一种寄主细胞，让细胞对重组DNA分子进行酶法复制；5.筛选或鉴别含有重组DNA分子的寄主细胞；重组DNA技术（recombinantDNAtechnology）遗传工程（geneticengineering）一.限制性内切酶和DNA连接酶制造重组DNA分子II型限制酶；DNA连接酶常用酶类：逆转录酶，多核苷酸激酶，末端转移酶外切核酸酶III，λ外切酶，碱性磷酸酶二.DNA克隆载体1.质粒2.噬菌体（λ，l

3、ambda）插入型载体，替换型载体体外包装（invitropackaging）3.细菌人工染色体（bacterialartificialchromosome，BACs）含筛选标记（CmR）和稳定的复制原点，含F质粒par基因和含插入位点的LacZ基因。转化（transformation）；电穿孔（electroporation）。三.建造基因文库（genomiclibrary）和cDNA文库（cDNAlibrary）1.某基因组的基因组文库鸟枪法建造基因文库（shotgunmethod）由某限制酶随机切割的基因组DNA，所获得的DNA片段经

4、纯化并与λ载体连接，包装，转染寄主细胞，获得克隆群体称基因文库。分子杂交法从基因文库中挑选特殊DNA片段克隆。2.cDNA文库从真核细胞纯化mRNA，经逆转录产生双链cDNA，再加以克隆。3.PCR方法第二节基因组和基因组学基因组学：在整个细胞整个物种基因组水平研究基因功能，研究整个基因组基因成份和功能的科学。