乳酸菌检测国标方法.docx

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1、乳酸菌检测方法1适用范围本方法适用于清谷田园食品有限公司系列产品及原料中的乳酸菌的检测。2设备和仪器 2.1恒温培养箱：36±1℃2.2天平：感量为0.01g2.3无菌吸管：1ml、2ml、10ml2.4无菌锥形瓶：500ml2.5无菌培养皿：直径为90mm2.6无菌试管：18×180mm2.9酒精灯2.10立式蒸汽压力灭菌器2.11超净工作台2.12厌氧缸3试剂 3.1无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。3.2MRS（ManRogosaSharpe）培养基3.2.1成分蛋白胨10.0g牛肉粉5.0g酵母粉

2、4.0g葡萄糖20.0g吐温801.0mLK2HPO4.7H2O2.0g醋酸钠.3H2O5.0g柠檬酸三铵2.0gMnSO4.7H2O0.2gMnSO4.4H2O0.05g琼脂粉15g3.2.2制法：将上述成分加于1000mL蒸馏水中，调节PH至6.2±0.2，加热煮沸溶解，分装于锥形瓶中，在121℃高压灭菌15-20min。3.3莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）和半胱氨酸盐酸盐改良MRS培养基：3.3.1  莫匹罗星锂盐储备液制备：称取50mg莫匹罗星锂盐加入到50mL蒸馏水中，用0.22 mm微孔滤膜过滤除菌。3.3.2  半胱氨酸盐酸盐储备液

3、制备：称取250mg莫匹罗星锂盐加入到50mL蒸馏水中，用0.22 mm微孔滤膜过滤除菌。3.3.3  制法将A.1.1 成分加入到950mL蒸馏水中，加热溶解，调节pH，分装后121 ℃高压灭菌15min～20min。临用时加热熔化琼脂，在水浴中冷至48 ℃，用带有0.22 mm微孔滤膜的注射器将莫匹罗星锂盐储备液及半胱氨酸盐酸盐储备液制备加入到熔化琼脂中，使培养基中莫匹罗星锂盐的浓度为50 mg/mL，半胱氨酸盐酸盐的浓度为500 mg/mL。3.4 MC培养基3.4.1  成分大豆蛋白胨          5.0g牛肉粉3.0g酵母粉3.0g葡萄糖2

4、0.0g乳糖                        20.0g碳酸钙10.0g琼脂15.0g蒸馏水1000mL1％中性红溶液5.0mL 3.4.2  制法将前面7种成分加入蒸馏水中，加热溶解，调节pH至6.0±0.2，加入中性红溶液。分装后121 ℃高压灭菌15min～20min。4检验程序乳酸菌检验程序见图1。5 操作步骤5.1样品制备5.1.1 样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。5.1.2 冷冻样品可先使其在2 ℃～5 ℃条件下解冻，时间不超过18h，也可在温度不超过45 ℃的条件解冻，时间不超过15min。5.1.3 固体和半固体食品：

5、以无菌操作称取25g样品，置于装有225mL生理盐水的无菌均质杯内，于8000r/min～10000r/min均质1min～2min，制成1:10样品匀液；或置于225mL生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min制成1:10的样品匀液。5.1.4 液体样品：液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成1:10的样品匀液。5.2 步骤5.2.1 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于装有9mL生理盐水的无菌试管中

6、（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。5.2.2 另取1mL无菌吸管或微量移液器吸头，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液，每递增稀释一次，即换用1次1mL灭菌吸管或吸头。5.2.3 乳酸菌计数5.2.3.1 乳酸菌总数乳酸菌总数计数的培养条件的选择和结果说明如表1所示表1乳酸菌总数计数的培养条件的选择和结果说明样品中所包括乳酸菌菌属培养条件的选择和结果说明仅包括双歧杆菌属按GB4789.34的规定执行仅包括乳杆菌属按照5.2.3.4操作。结果即为乳杆菌属总数仅包括嗜热链球菌按照5.2.3

7、.3操作。结果即为嗜热链球菌总数同时包括双歧杆菌属和乳杆菌属按照5.2.3.4操作。结果即为乳酸菌属总数如需单独计数双歧杆菌属数目，按照5.2.3.2操作同时包括双歧杆菌属和嗜热链球菌按照5.2.3.2和5.2.3.3操作，二者之和为乳酸菌总数如需单独计数双歧杆菌属数目，按照5.2.3.2操作同时包括乳杆菌属和嗜热链球菌按照5.2.3.3和5.2.3.4操作，二者之和为乳酸菌总数2）按照5.2.3.3操作。结果即为嗜热链球菌总数3）按照5.2.3.4操作。结果即为乳酸菌属总数同时包括双歧杆菌属、乳杆菌属和嗜热链球菌按照5.2.3.3和5.2.3.4操作，二

8、者之和为乳酸菌总数如需单独计数双歧杆菌属数目，按照5.2.3.2操