仪器分析复习.doc

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1、1分析仪器的性能指标•精密度：分析数据的精密度指同一台分析仪器的同一方法多次测定得到数据间的一致程度•灵敏度：指区别具有微小浓度差异分析能力的度量，取决于校准曲线的斜率和仪器设备的重现性或精密度。•检出限：物质检出的最低浓度范围•动态范围（线性范围）•响应速度：指仪器对检测信号的反应速度，定义为仪器达到信号总变化量一定百分数所需的时间•分辨率：指仪器鉴别由两组近组分产生信号的能力，不同类型仪器分辨率的指标不同2仪器定量校准方法：内标法和外标法•内标法：标准物质和被测定物质不是同一物质•外标法：标准物质与被测定物质是同

2、一物质3方法的可靠性通过实验数据的统计分析来实现的，主要论证的参数有专一性、灵敏度（检出限）、定量限、精密度或稳定性、准确度、耐用性、线性范围、标准曲线、回归方程和回收率等4仪器分析的一般过程：取样Ø样品的采集：样品必须具有代表性，并且不能被污染，也不应有组分的损失；Ø根据实验目的合理设计取样时间及取样量以及样品保藏方式；Ø步步留样，样品完成分析后要保留一定时间，以便于出现问题后可以追溯分析Ø标签清晰：标明物料名称（What）、人（Who）、时间（When）5仪器分析的一般过程：有效数字•有效数字：实际能测到的数字，

3、反映测量的准确程度，有效数字保留的位数，应根据分析方法和仪器准确度来确定，应使数值中只有最后一位是可疑的；•数字“0”作为普通数字使用，是有效数字，作为定位数字使用，不是有效数字；•pH，pKa，log等的有效数字:有效数字位数由小数部分决定，如pH=12.51是两位•有效数字的运算：绝对误差最大者为标准(加减按最少小数位数计算，乘除按最少有效数字位数计算)6朗伯——比耳定律•分光光度法的定量依据是朗伯——比耳定律（Lambert-Beer’sLaw）A＝lg（I0/I）＝KCL式中：I0为入射光强度；I为透射光强度

4、；A为吸光度；L为液层厚度(即光程长度)；C为溶液浓度；K为吸光系数；上式是朗伯——比耳定律的数学表达式，其物理意义为：当一束平行单色光通过均匀的有色溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比。朗伯——比耳定律不仅适用于有色溶液，也适用于其它均匀、非散射的吸光物质(包括液体、气体和固体)，是各类吸光光度法的定量依据。分光光度法测定只适用于稀溶液:≤0.01M一Proteome&Proteomics定义Proteome(蛋白质组):由1个细胞，或1种器官或组织的基因组所表达的全部相应的蛋白质。Proteom

5、ics（蛋白质组学）:研究在某个时间或某种特定条件下细胞或组织的蛋白表达及其活动规律的科学。二蛋白质组学的研究内容1.细胞或组织内蛋白质的表达模式及修饰（表达蛋白质组学）：关键技术：2-D电泳2.蛋白质的胞内分布及移位（细胞图谱蛋白质组学）：确定蛋白质在亚细胞结构中的位置，通过纯化细胞器或用质谱仪鉴定蛋白复合物组成等。3.蛋白质的序列和高级结构（结构蛋白质组学）：X-射线单晶衍射分析（晶体结构分析）、多维核磁共振波谱分析、电镜二维晶体三维重构术（电子晶体学）。4.蛋白质的功能模式（功能蛋白质组学）：蛋白质与蛋白质及其

6、与其他分子的相互作用。三、蛋白质组研究的相关技术（一）研究细胞或组织内蛋白质表达模式的技术：2-D电泳操作（1）等电聚焦。（2）平衡胶条。（3）第二相SDS-PAGE。（4）2-D胶上蛋白质鉴定A早期Westernblot鉴定BEdman降解法鉴定C肽质量指纹鉴定D蛋白质组信息学（二）研究蛋白质胞内分布及移位的方法1.研究蛋白质组的高通量方法。分别收集细胞不同区域内蛋白质，然后进行2-D电泳和蛋白质鉴定。2.将胞内特定蛋白质进行荧光标记，然后在荧光显微镜下进行观察蛋白质移位。（三）构象解析技术1.实际测定具体蛋白质的

7、三维结构：X-射线单晶衍射分析（晶体结构分析）、多维核磁共振波谱分析、电镜二维晶体三维重构术（电子晶体学）。X-射线单晶衍射分析：最成熟和最有力的方法。运用原子力显微镜及多功能光学诊断技术深入研究蛋白质晶体生长的机理。2.通过氨基酸序列知识去辨识和推引出其决定的三维结构（1）用分子力学、分子动力学的方法，根据理化的基本原理，从理论上计算蛋白质分子的空间结构。（2）通过对已知空间结构的蛋白质进行分析，找出一级结构与空间结构的关系，总结出规律，用于新蛋白质空间结构的预测。（四）研究蛋白质功能模式的技术酵母双杂交系统选择性

8、噬菌体感染技术质谱技术四蛋白质组学研究中的困难1.2-D电泳胶上的点只是细胞蛋白质中的一小部分，大部分不能被显示。2.2-D胶上显示的蛋白质有偏向性。3.难溶于水或分子量大于18万的蛋白质难于在2-D胶上显示。4.质谱技术虽有较高的灵敏度，但对来自2-D胶上的许多低丰度的蛋白质仍不能鉴定。五SDS十二烷基硫酸钠：断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白