高中生物专题5DNA和蛋白质技术课题3血红蛋白的提取与分离课件【新人教版】.ppt

《高中生物专题5DNA和蛋白质技术课题3血红蛋白的提取与分离课件【新人教版】.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、成才之路·生物路漫漫其修远兮吾将上下而求索人教版·选修1DNA和蛋白质技术专题五课题3血红蛋白的提取与分离专题五课堂合作探究2思维创新升华3知识体系构建4课时作业5课前预习导学1课前预习导学1.掌握提取生物大分子的基本过程和方法。(重点)2．理解凝胶色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。(重、难点)3．尝试对血液中的血红蛋白进行提取和分离。一、凝胶色谱法1．概念：也称做___________，是根据________________分离蛋白质的有效方法。2．原理当_______________不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子

2、质量________的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程________，移动速度________，而相对分子质量________的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在____________移动，路程________，移动速度________，从而使_______________不同的蛋白质分子得以分离。分配色谱法相对分子质量大小相对分子质量较小较大较慢较大凝胶外部短快相对分子质量二、缓冲溶液1．作用：在一定范围内，抵制________的________对溶液pH的影响，维持pH__________。2．配制：由______

3、__种缓冲剂溶解于________中配制而成，通过调节缓冲剂的________就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。外界酸和碱相对稳定1～2水使用比例三、电泳1．概念：指________在电场的作用下发生的________的过程。2．原理：在一定的________下，________、________等生物大分子的可解离基团会带上________或________，在________的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷________的电极移动。带电粒子迁移pH多肽核酸正电负电电场相反3．作用：电泳利用了待分离样品中各种分

4、子________的差异及分子本身的________、________的不同，使带电分子产生不同的________，从而实现样品中__________的分离。4．方法：常用的电泳方法有________________和___________________。测定蛋白质分子量时通常使用______________________________。带电性质大小形状迁移速度各种分子琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胺电泳SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳四、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：________、________、________

5、和__________。1．样品处理(1)红细胞的洗涤：目的是____________。采用__________离心，吸取血浆后加________洗涤，直至上清液中没有________，表明红细胞已洗涤干净。(2)血红蛋白的释放：在________和________的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。样品处理粗分离纯化纯度鉴定去除杂蛋白低速短时间生理盐水黄色蒸馏水甲苯(3)分离血红蛋白溶液：把混合液离心后，将试管中的液体用滤纸过滤，除去_____________，于分液漏斗中静置片刻后，分离出下层的_____________

6、。(4)透析：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子物质保留在袋内。脂溶性沉淀层红色透明液体2．凝胶色谱操作(1)凝胶色谱柱的制作：准备材料→加工橡皮塞→安装色谱柱。(2)凝胶色谱柱的装填。(3)样品的加入和洗脱。其基本过程是调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。至此，血红蛋白即可得到粗分离。3．纯度鉴定：在鉴定的方法中，使用最多的是_________________________。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳五、操作提示1．红细胞的洗涤：_________、__________与__________十

7、分重要。洗涤次数过少，无法除去________；离心速度_____和时间_____会使______等一同沉淀，达不到分离效果。2．色谱柱填料的处理：商品凝胶使用前需直接放在________中膨胀，可以将加入其中的湿凝胶用____________，加速膨胀。3．凝胶色谱柱的装填：在装填凝胶柱时，不能有________存在。因其能搅乱洗脱液中蛋白质的________，降低分离效果。4．蛋白质的分离：如果________________________，说明色谱柱制作成功。洗涤次数离心速度离心时间血浆蛋白过高过长白细胞洗脱液沸水浴加

8、热气泡洗脱次序红色区带均匀一致地移动红细胞破碎后混合液中含有什么成分？红细胞破碎混合液中不仅含有血红蛋白，而且还含有细胞破碎物、脂质、甲苯等。教材P70“旁栏思考题”凝胶实际上是一些微小的多孔球体，小球体内部有许多贯穿的通道。相对分子质量较大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，