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时间:2020-09-27
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1、一、液相色谱仪器highperformanceliquidchromatograph2021/10/1液相色谱仪(2)2021/10/1液相色谱仪(3)2021/10/1液相色谱仪(4)2021/10/1二、高效液相色谱法的特点featureofHPLC特点:高压、高效、高速高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。2021/10/1三、流程及主要部件processandmainassemblyofHPLC1.流程2021/10/12.主要部件(1)高压输液泵主要部件之一,压力:150~350×
2、105Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10μm),液体的流动相高速通过时,将产生很高的压力,因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性(动画)2021/10/1(2)梯度淋洗装置外梯度:利用两台高压输液泵,将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室,混合后进入色谱柱。内梯度:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。2021/10/1(3)进样装置流路中为高压力工作状态,通常使用耐高压的六通阀进样
3、装置,其结构如图所示:2021/10/1(4)高效分离柱柱体为直型不锈钢管,内径1~6mm,柱长5~40cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。2021/10/1(5)液相色谱检测器a.紫外检测器应用最广,对大部分有机化合物有响应。特点:灵敏度高;线形范围高;流通池可做的很小(1mm×10mm,容积8μL);对流动相的流速和温度变化不敏感;波长可选,易于操作;可用于梯度洗脱。2021/10/1b.光电二极管阵列检测器紫外检测器的重要进展;光电二极管阵列检测器:1024个二极管阵列,各检测特定波长,
4、计算机快速处理,三维立体谱图,如图所示。2021/10/12021/10/1光电二极管阵列检测器2021/10/1c.示差折光检测器(differentialrefractiveindexdetector)除紫外检测器之外应用最多的检测器;可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比;通用型检测器(每种物质具有不同的折光指数);灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱;偏转式、反射式和干涉型三种;2021/10/1d.荧光检测器(fluorescencedetector)高灵敏度、
5、高选择性;对多环芳烃,维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应;2021/10/1第十三章高效液相色谱分析法一、液-固吸附色谱liquid-solidadsorptionchromatograph二、液-液分配色谱liquid-liquidpartitionchromatograph三、离子交换色谱ion-exchangechromatograph四、离子色谱ionchromatograph五、离子对色谱ion-pairchromatograph六、排阻色谱size-e
6、xclusionchromatograph七、亲和色谱(AC)Affinitychromatograph第二节主要分离类型与原理highperformanceliquidchromatographbasicprincipleandmainseparatingtypes2021/10/1一、液-固吸附色谱liquid-solidadsorptionchromatography固定相:固体吸附剂为,如硅胶、氧化铝等,较常使用的是5~10μm的硅胶吸附剂;流动相:各种不同极性的一元或多元溶剂。基本原理:组分
7、在固定相吸附剂上的吸附与解吸;适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样,对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性;缺点:非线形等温吸附常引起峰的拖尾;2021/10/1二、液-液分配色谱liquid-liquidpartitionchromatography固定相与流动相均为液体(互不相溶);基本原理:组分在固定相和流动相上的分配;流动相:对于亲水性固定液,采用疏水性流动相,即流动相的极性小于固定液的极性(正相normalphase),反之,流动相的极性大于固定液的极性(反相reversephase)。正
8、相与反相的出峰顺序相反;固定相:早期涂渍固定液,固定液流失,较少采用;化学键合固定相:(将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶(担体)表面的游离羟基上。C-18柱(反相柱)。2021/10/1三、离子交换色谱ion-exchangechromatography固定相:阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂;流动相:阴离子离子交换树脂作固定相,采用酸性水溶液;阳离子离子交换树脂作固定相,采用碱性水溶液;基本原理:组分在固定相上发生的反复离子交换
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