病理检验技术.ppt

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1、病理检验技术平凉医专病理教研室赵守健（1）取材（2）固定（3）脱水（4）包埋（5）切片（6）染色（7）封固在这七个主要过程中，又包括着若干步骤制作切片的主要过程取材应选择病变或可疑病变的组织。必要时选取病变与正常组织交界处。切取标本的原则是求准而不是求量多，所以切取组织宜小不宜大，以不超过24x24mm2为佳，厚度以3—5mm为度，过大过厚会影响对标本的固定，另方面也影响切片的制作。冰冻切片        石蜡切片        火棉胶切片︳          ↓          ︳——————————→取材←——————————↓固定↓冰冻←————————冲水∣    

2、      ↓∣          脱水———————————∣          ↓          ↓∣透明        乙醚酒精∣          ↓          ↓∣          浸蜡        胶液渗透      ∣          ↓          ↓∣          石蜡包埋    火棉胶包埋    ↓          ↓          ↓冰冻切片  切片        切片  ↓          ↓          ↓染色     染色        染色  ↓          ↓          ↓

3、封固      封固        封固固定固定是指将各种组织浸入防腐剂内，使细胞内的物质为不溶性。固定的作用即是用一种方法将组织尽可能保持在它原来的形态，且能适于某些研究程序。固定的目的是为了防止组织细胞自溶与腐败，防止了细胞内的酶对蛋白质的分解作用，使细胞内的各和成分如蛋白质、脂肪、碳水化合物或酶类转变为不溶性物质，以保持原有的结构与生活时相仿。另外，组织固定后，均呈一定的硬化状态，增加组织韧性，而且不易变形，有利于以后的组织处理。固定剂常用单一固定试剂有甲醛，洒精，冰醋酸，苦味酸，重铬酸钾，饿酸，氧化汞，丙酮等。除福尔马林，酒精和丙酮常用作单一固定剂外，其它多作混合液中的一种成

4、分。脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以利于有机溶剂的渗入，这一过程称为脱水。脱  水一般情况下，组织经过70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求。但是为了能使大量的组织块同时进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒

5、精开始，再经80％，95％以至无水酒精。一般1cmX1cmX0.2cm大小的组织,脱水全过程仅需要数小时即可达到完全脱水。在各级浓度酒精内处理的最短时间分别减少到2—4小时也能获得满意的结果。如果组织脱水不尽,随后的透明,浸蜡都会受到影响,致使切片很难以完成。可用作固定液,也是一种比较好的脱水剂。脱水能力强、速度快,可配制不同浓度进行脱水。但一般情况下,多用在无水酒精的补充脱水。丙酮脱水时间比酒精强,但容易使组织过度硬化,所以应适当掌握脱水时间。丙酮(Acetone)1．取材：骨组织固定于10%福尔马林24小时后再锯取厚度约0.5厘米骨片。2．固定：再以10%福尔马林固定2天。3．将

6、组织置于脱钙剂中，每日更换新鲜液、直至组织软化为止。4．流水冲洗24小时（除酸）。5．进行常规脱水，透明，浸蜡，切片。脱钙步骤配方：硝酸（用0.1尿素稳定）5－10ml蒸馏水      加至100ml此液用作常规脱钙剂，作用迅速，对组织不膨胀，对细胞的保存和染色比前者更好，能适用多种染色技术，但每日需要更换新鲜溶液，最好早晚各一次，一般1－3天完成。横切人肋骨（5mm）在12－24小时内脱钙。硝酸水溶液透  明二甲苯：是最为常用的一种透明剂，它能与酒精，丙酮相混合，又是石蜡的溶剂。在透明过程中，组织继续发生硬化，由于二甲苯对组织的收缩性强，作用迅速，因此，组织在二甲苯中时间不宜过长，

7、否则组织容易变脆变硬，一般是达到组织的透明为度，小块组织在半至一小时内透明。浸  蜡组织经媒剂的透明作用之后，移入熔化的石蜡内浸渍，石蜡逐渐浸入组织间隙，取代透明剂，这一程序就叫浸蜡。根据所用石蜡的熔点，浸蜡需要能够保持于54－60.C温箱内进行。为了尽可能排除透明剂，浸蜡可以分两级或三级进行。以熔点较低的软石蜡作为第一步，然后再换为熔点较高的石蜡作为第二步，第三步。浸蜡时间1－4小时，或更长，并使之过夜则较易切割包  埋包埋，就是将已经经过固