第十四章细菌的生化试验和血清学试验ppt课件.ppt

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1、第十四章细菌的生化试验和血清学试验第一节细菌的生化试验一、概述（一）生化试验指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。（二）检验细菌的生化试验范围1、糖（醇）类代谢试验；2、氨基酸和蛋白质代谢试验；3、有机酸盐和铵盐的利用试验；4、呼吸酶类试验；5、毒性酶类试验。（三）生化试验的方法1、在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、培养后,观察培养基的pH值变化；2、在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应；3、根据酶作用的反应特性，测定酶的存在；4、根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细

2、菌的生长情况。（四）生化试验的注意事项1、待检菌应是新鲜培养物。培养18~24h；2、待检菌应是纯种培养物；3、遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为24或48小时；4、应做必要的对照试验；5、提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑似菌落分别进行试验。二、糖醇类代谢试验（一）糖发酵试验（二）甲基红（MethylRed）试验（MR）（三）V-P试验（四）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验（五）七叶苷水解试验（六）甘油品红试验（一）糖发酵试验原理多糖－→单糖－→丙酮酸－→酸性产物(或产酸产气)－→pH↓－→指示剂呈酸性变色(若产气者有气泡出现)培养基：糖发酵管、

3、半固体发酵管、微量发酵管试剂：酚红、溴甲酚紫等结果:培养基呈酸性变色应用：鉴定鉴定细菌最主要的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。糖发酵试验结果判断反应现象结果描述酸性变色、有气泡分解××糖产酸、产气酸性变色、无气泡分解××糖产酸、不产气培养基不变色不分解××糖糖发酵试验葡萄糖HCOOH脱氢酶CO2+H2葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖常用的糖醇单糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖；双糖：乳糖、蔗糖、麦芽糖；三糖：棉子糖；多糖：菊糖、肝糖、淀粉；醇类：甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇。（二）甲基红（MethylRed）试验（MR）原理：细菌分解糖

4、，产生丙酮酸，进一步生成大量混合酸，使培养基pH维持在4.4以下，加入甲基红后，使甲基红呈现红色反应。此为甲基红试验阳性。培养基：葡萄糖蛋白胨水试剂：甲基红试剂试验方法：挑取新鲜的待试培养物少许，接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于36±1℃培养18-24h后，加入甲基红指示剂1~2滴，立即观察结果结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+培养基不变色：－应用：主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性，而肠杆菌属、哈夫尼亚菌属则为阴性。（三）伏－普试验（V-P试验）原理：细菌发酵

5、葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化合物。培养基：葡萄糖蛋白胨水试验方法：贝立脱法：将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于36±1℃培养2天，每2ml培养液先加入6%a-萘酚纯酒精溶液1ml，再加40%氢氧化钾水溶液0.4ml，摇动2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1℃培养4h，如显现红色为阳性，呈黄色或有类似铜色者，可判定为阴性。结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+培养基不变色：－VP试验阴性阳性大肠杆菌：-产气

6、杆菌：+应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基红试剂培养基变红乙酰甲基甲醇二乙酰V-P试剂培养基变红脱酸V－P试验甲基红试验（四）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验1、原理：细菌对葡萄糖的分解，分为氧化型和发酵型。氧化型细菌在有氧的条件下才能分解葡萄糖，无氧的条件下不能分解葡萄糖；发酵型细菌在有氧无氧条件下均可分解葡萄糖；不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。根据糖管的色泽变化可鉴别细菌。2、方

7、法取待检菌，以穿刺法接种于两管葡萄糖半固体培养基上，在其中一管加入一层（约1cm）灭菌的液体石蜡以隔绝空气，在37℃培养2~4h天，每天观察结果。O-F试验（葡萄糖氧化发酵试验）氧化型发酵型产碱型3、结果观察与记录封油管未封油管发酵型产酸（黄色）产酸（黄色）氧化型不产酸（绿色）产酸（黄色）产碱型不产酸（绿色）不产酸（绿色）4、应用：肠杆菌科与非发酵菌的鉴别；葡萄球菌与微球菌的鉴别，前者为发酵型，后者为氧化型（一）靛基质（吲哚）试验（二）H2S试验（三）尿素酶试验（四）氨基酸脱羧酶试验（五）苯丙氨酸脱氨酶试验（六）明胶（Gelatin）液化试验三、氨基酸和

8、蛋白质代谢试验（一）靛基质试验1、原理：某些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色