细菌生化试验

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1、1糖类发酵试验（1）培养基需氧菌适用的培养基配方：蛋白胨1g，氯化钠0.5g，蒸馏水100ml，糖物质0.5-1g，0.2%溴麝香草酚蓝水溶液1.2ml配制：除指示剂外，溶解各成分，调ph值为7.4-7.6，加入指示剂混匀，分装试管。管内事先装有倒置的小玻璃管。经高压灭菌20min。厌氧菌糖发酵培养基配方：蛋白胨20g，氯化钠5g，糖物质10g，硫乙醇酸钠1g，琼脂1g，蒸馏水1000ml，1.6%溴甲酚紫酒精溶液水溶液1ml配制：除指示剂外，溶解各成分，调ph值为7.2-7.4，加入指示剂，高压灭菌。血清半固体糖发酵培养基配方：0.3%肉膏100ml，琼脂0.3g，糖物质0.5-1g，0

2、.5%酸性复红2ml，兔血清或小牛血清10ml。配制：争取0.3%肉膏100ml，加入琼脂，煮沸融化后，加入糖类物质及指示剂，高压灭菌，待培养基冷至50℃左右，缴入经56℃灭活30min的兔血清10ml，分装于无菌试管，无菌检查后备用。(2)恒温培养箱，高压锅，电炉，搪瓷缸以及接种针等。实验步骤：（1）按照上述的培养基配方，根据需要选择配制培养基，高压灭菌并作无菌检查后备用。（2）取培养18-24h的试验菌，接种于培养基中，置于37℃培养数小时至2周后观察结果。（3）结果记录：指示剂由紫色变为黄色，表示糖类发酵产酸，以“+”表示；若指示剂由紫色变为黄色且试管内倒置的小管内有气泡出现，则表示

3、产酸产气，以“o+”表示；若指示剂颜色未改变，则表示对糖类不发酵，以“-”表示。2甲基红（MR）试验器材准备（1）培养基：葡萄糖蛋白胨水配方：蛋白胨0.7g，磷酸氢二钾0.5g，葡萄糖0.5g，蒸馏水0.5g。配制：将上述各成分混于蒸馏水中，加热溶解，调pH值为7.2-7.4，滤纸滤过，分装于小试管内，每管3-5ml，加塞包好，高压灭菌。（2）试剂：甲基红0.02g、95%酒精60ml，蒸馏水40ml.（3）恒温培养箱、高压锅、电炉、搪瓷缸、玻棒以及接种环。实验步骤（1）将待检菌接种于培养基中，置于37℃培养48h。（1）取少量培养液于另一个试管中，加入几滴指示剂，观察颜色变化，若无颜色变

4、化可继续培养4-5d再进行试验。（2）结果判定：培养液呈现红色，为甲基红试验阳性，呈现黄色者为阴性。3维培二氏试验（VP试验）器材准备（1）培养基：同MR试验。（2）试剂奥梅拉氏试剂：0.3g肌酸或肌酐溶于100ml40%氢氧化钾即成。贝立脱氏试剂：甲液为6%a-萘酚酒精溶液，乙液为16%氢氧化钠溶液。硫酸铜试剂：1g硫酸铜溶于40ml氨水中，再加10%氢氧化钠至1000ml。（3）恒温培养箱，高压锅，电炉、搪瓷缸、玻棒以及接种环等。试验步骤（1）将被检细菌接种到葡萄糖蛋白胨水中，置于37℃培养48h。（2）在培养物中加入等量的奥梅拉氏试剂，混合，或1ml培养物加入0.5ml贝立脱氏试剂甲

5、液和乙液振荡混合，观察结果。（3）结果判定：在0.5min内呈现粉红色反应为阳性；长时间无反应，置于37℃培养4h或室温过夜，颜色仍不变者为阴性。4，硫化氢试验器材准备（1）培养基醋酸铅琼脂培养基（一）配方：肉汤琼脂100ml。硫代硫酸钠0.25g，10%的醋酸铅水溶液3ml。配制：加热融化肉汤琼脂，冷至60℃，加入硫代硫酸钠，使其溶解。调节pH值至7.2，高压灭菌，取出冷至60℃时加入预防灭菌的10%的醋酸铅水溶液，混匀，无菌分装小试管，直立凝固。醋酸铅琼脂培养基（二）配方：蛋白胨20g，磷酸氢二钠2g，葡萄糖1g，琼脂2g，10%的醋酸铅水溶液2ml,蒸馏水1000ml。配制：将除醋酸

6、铅以外的各成分混合于蒸馏水中，加热溶解，调节pH值为7.0-7.4，然后加入醋酸铅水溶液，混合均匀，分装试管内，高压灭菌，取出摇匀，直立凝固呈柱状。三氯化铁明胶培养基配方：硫胨25g，氯化钠5g，牛肉膏7.5g，明胶120g，10%三氯化铁水溶液5ml。配制：将除三氯化铁水溶液以外的成分混合，加热融化并高压灭菌，趁热加入预先灭菌的10%三氯化铁水溶液，混匀，无菌分装小试管，直立凝固。（2）恒温培养箱，高压锅，电炉，搪瓷缸等（3）小试管。玻棒、接种环以及pH试纸等。实验步骤：1醋酸铅琼脂法（1）用接种针取待检细菌，沿培养基的试管壁作穿刺接种，37℃培养1-2d，必要时可延长5-7d。（2）结

7、果判定：延穿刺线的培养基变为黑色为阳性，否则为阴性。2三氯化铁明胶培养基法（1）用接种针取待检菌沿管壁作穿刺接种，37℃培养观察2-7d。（2）结果判定：明胶变黑色为阳性，否则为阴性。本文档原文来自于胡佳学主编的《兽医微生物学实验教程》，由本人整理获得。