细菌的生化试验2015学习资料.ppt

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1、第三节细菌的生化鉴定技术细菌的基本鉴定技术生化反应鉴定：通过观察细菌利用酶和降解糖类、醇类、脂类、蛋白质和氨基酸的能力可以了解其生化活性，从而识别和鉴定细菌。免疫学鉴定（血清学鉴定）编码鉴定第一碳水化合物代谢试验一、糖（醇、苷）类发酵试验：原理：各种细菌含有发酵不同糖类的酶，分糖类的能力各不相同，且不同细菌分解同一种糖的代谢产物也不一定相同。糖发酵试验结果判断反应现象结果描述酸性变色、有气泡分解××糖产酸、产气酸性变色、无气泡分解××糖产酸、不产气培养基不变色不分解××糖1．原理：细菌在分解葡萄糖的代谢

2、过程中根据对氧分子参加的需要，分成三种类型：需要分子氧参加的为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型，发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖。在有氧和厌氧环境中都不能分解葡萄糖的细菌为产碱型或不活动型细菌。二．葡萄糖的氧化/发酵试验：2．结果：发酵特征试管颜色不变而氧化特征试管颜色变黄，表明试验细菌的葡萄糖分解代谢为氧化型；两管颜色均变黄色为发酵型；两支培养管颜色均不变为产碱型或不活动型。O管F管O管F管糖发酵试验原理：细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸和琥珀

3、酸等，使培养pH下降至4.5以下时，加入甲基红指示剂呈现红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其它物质(如醇、酮、醛、气体和水)，培养基pH在5.4以上，甲基红(MR)试验呈橘黄色。三．甲基红试验：2．结果：呈现红色者为阳性；橘黄色为阴性；橘红色为弱阳性。MR阴性MR阳性某些细菌分解葡萄糖后生成丙酮酸，丙酮酸的分解产物则因细菌种类不同而有差别，如产气肠杆菌能使丙酮酸脱羧产生中性的乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中的氧氧化成二乙酰，在α-奈酚的催化作用下与培养基中氨基酸如精氨酸

4、中的胍基化合物络合形成红色的化合物，即V-P试验阳性。四．V-P试验：VP阴性VP阳性五．β—半乳糖苷酶试验(ONPG试验)：迟缓分解乳糖的细菌可产生β—半乳糖苷酶，能分解邻硝基酚-β-半乳糖苷(ONPG)而释放出黄色的邻硝基酚。故此试验又称为ONPG试验。细菌分解乳糖需二种酶半乳糖苷渗透酶β—半乳糖苷六．七叶苷水解试验：1．原理：七叶苷可被细菌水解，生成葡萄糖和七叶素。七叶素与培养基中的枸橼酸铁的二价铁离子反应生成黑色的化合物，使培养基变黑。2．结果：培养基变为黑色或棕黑色者为阳性，不变色者为阴性。第

5、二蛋白质和氨基酸代谢试验有些细菌具有色氨酸酶，能分解培养基中的色氨酸，生成吲哚。吲哚与试剂对位二甲氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。一．吲哚试验(靛基质试验)I阴性I阳性二．尿素酶试验：某些细菌能产生尿素酶，分解尿素产生氨，使培养基变碱，使酚红指示剂变红色。U阳性U阴性四．苯丙氨酸脱氨酶试验：细菌分解氨基酸，可通过脱氨基或羧基生成反应物，这些反应由酶反应进行的，试验应选择合适底物。有些细菌能产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸氧化脱氨后生成苯丙酮酸，与三氯化铁试剂产生深绿色反应。苯丙氨酸脱氨酶试验阴性阳性

6、第三碳源利用试验枸橼酸盐利用试验C阴性C阳性在枸橼酸盐培养基中，细菌能利用的碳源只有枸橼酸盐，分解后生成碳酸钠，使培养基变碱性，pH指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿色变为深蓝色。能利用枸橼酸盐作为碳源的细菌也可利用氮源。第四呼吸酶类试验硝酸盐还原试验硝酸盐还原反应包括两个过程：即细菌在合成代谢过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，由氨转化为氨基酸和细胞内其它含氮化合物；细菌在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。硝酸盐还原的过程可因细菌不同而产物各异，有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐；

7、有的细菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌还能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮；有的细菌还可以将其还原产物在合成代谢中完全利用。硝酸盐或亚硝酸盐如果还原生成气体的终末产物，如氮和氧化氮，称为脱硝化作用。硝酸盐还原试验是测定还原过程中生成的亚硝酸。硝酸盐还原试验阴性阳性氧化酶试验【原理】氧化酶又称细胞色素氧化酶，能将还原型细胞色素C氧化形成水和氧化型细胞色素C，氧化型细胞色素C再使四甲基对苯二胺氧化，形成显色反应。氧化酶试验【试剂与器材】1．菌种大肠埃希菌、铜绿假单胞菌2．试剂氧化酶试剂（1%四甲基对苯

8、二胺）3．器材2cm×2cm滤纸片、污物缸氧化酶试验【操作步骤】1．将滤纸片叠成四方块状。2．用滤纸片的中心尖角小心刮取大肠埃希菌菌落，注意不可碰到培养基。3．轻轻展开滤纸片，刮取的菌落正好在滤纸片中心，滴加一滴1%四甲基对苯二胺。4．立刻观察菌落颜色的变化。5．同法做铜绿假单胞菌的氧化酶试验。氧化酶试验【结果】滴加氧化酶试剂后铜绿假单胞菌立刻变为紫色，为氧化酶阳性。大肠埃希菌不变色，为氧化酶阴性。氧化酶试验（左侧为铜绿假单胞菌、右侧为大肠