实验一黄柏皮中小檗碱的提取.doc

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1、实验一黄柏皮中小檗碱的提取、分离与鉴定一、实验目的1掌握从黄柏皮中提取小檗碱的原理和方法。2掌握柱层析的基本操作方法以及其在中药有效成分提取分离过程中的应用。3掌握生物碱的鉴别方法。二、实验原理1、概述生物碱是植物中含氮的碱性有机化合物,大都有明显的生理活性,是许多中草药中的有效成分。它们是人类对植物研究得最早最多的一类有效成分,现已分离出有六千余种。这些生物碱在植物体内一般均与有机酸或无机酸结合成盐而存在,只有弱碱性生物碱往往呈游离状态,还有一些是与糖结合成苷而存在。小檗碱又名黄连素,是最先由毛莨

2、科黄连（CoptischinensisFran）和芸香科黄柏(PhellodendronamurenseRup.)等植物中提出的一种黄色生物碱。黄连属植物的根茎、须根、叶中等都含有小檗碱、黄连碱、药根碱、巴马亭等生物碱,我国黄连药材产量占世界第一位。现已发现，唐松草属（Thalictrum）、小檗科的小檗属(BerberisL.)、十大功劳属(MahomiaNuff)及防己科的天仙藤属（Fibraurea）等都可作为提取小檗碱的资源植物本实验是从黄柏皮中提取小檗碱。黄柏皮是豆科植物黄皮树（Phell

3、odendronchinenseSchneid）或黄檗（P.amurenseRupr.）的树皮，其主要有效成分为小檗碱，小檗碱及其盐类有较好的抗菌作用，临床用以治疗菌痢和一般炎症。小檗碱是一种季铵碱,其游离碱为黄色针晶,Mp.145℃(乙醚),微溶于水,能溶于热水和乙醇中，难溶于苯、丙酮、氯仿，几乎不溶于石油醚。小檗碱与氯仿、丙酮、苯在碱性条件下均能形成加成物。不同小檗碱盐类在水中的溶解度均有较大差别。小檗碱盐酸盐难溶于冷水，易溶于热水；硫酸盐易溶于水。溶解度分别为:小檗碱,1∶２０（冷水）,1∶1

4、00(冷乙醇);盐酸盐,1∶500(冷水);硫酸盐,1∶30(冷水),利用这些特性提取盐酸小檗碱。小檗碱加热至110℃变为黄棕色，于160℃分解。盐酸小檗碱加热至220℃分解，生成红棕色的小檗红碱，因此干燥时温度不宜太高（一般不超过80℃）。小檗碱盐酸小檗碱2、提取分离原理小檗碱属于季铵碱，其游离型在水中的溶解度最大。而其盐类以含氧酸盐在水中溶解度较大，不含氧酸盐难溶于水，其盐酸盐在水中溶解度则更小。利用此性质结合盐析法，可从黄柏皮中提取小檗碱。由于黄柏中含有大量的粘液质，故采用石灰乳法，使药材的粘

5、液质与石灰乳生成难溶于水的钙盐，同时碱性条件下小檗碱游离出溶于水层，加盐酸使其转变为盐酸盐，降低其在水中的溶解度，再结合盐析法，使小檗碱以沉淀析出。一、仪器与试剂1.仪器：渗漉柱、层析柱、烧杯、布氏漏斗、抽滤瓶、蒸发皿、滤纸、锥形瓶、螺旋夹等2.试剂与样品：黄柏皮粉、石灰乳、蒸馏水、食盐、10%盐酸、浓盐酸、95%乙醇、中性氧化铝（100-200目）、脱脂棉、漂白粉水溶液、碘化铋钾试剂、碘化汞钾试剂、碘化碘钾试剂、硅乌酸试剂。二、实验内容及流程（一）小檗碱的提取 称取黄柏皮粗粉200g，加入150m

6、l石灰乳拌湿，溶胀30min后加入8倍量水浸渍90min后渗漉。渗漉液加入总体积20%的食盐（缓慢加入），部分未溶解NaCl用玻棒缓缓搅拌，静置30min，抽滤，得小檗碱粗品。（二）小檗碱的精制 将所有粗品（湿品）称重，放入烧杯中，加20倍量蒸馏水，加热至沸，趁热抽滤，略放冷后向滤液中滴加浓盐酸，调pH到2，放置2h，过滤，滤出的沉淀用少量蒸馏水洗至pH值为5，抽干，80℃以下干燥，称重，得精制盐酸小檗碱。（三）柱层析演示实验 （四）检识1．生物碱的一般鉴定反应去少量精制盐酸小檗碱，用酸水溶解，分成

7、四份，分别滴加试剂（1）碘化铋钾试剂，观察产生沉淀颜色；（2）碘化碘钾试剂，观察产生沉淀颜色；（3）硅乌酸试剂，观察产生沉淀颜色或溶液浑浊情况。记录观察到的现象和反应结果以及得出结论。2、小檗碱的特殊鉴别反应取盐酸小檗碱少许，加稀盐酸2ml溶解后，加漂白粉液3滴，即产生樱红色。实训思考1．从黄柏皮中提取小檗碱是利用了它的什么性质？2． 提取分离过程中加NaCl起什么作用？实验二  虎杖中蒽醌类成分的提取分离与鉴定【实验目的】1．了解苷和苷元的提取分离方法2．掌握pH梯度萃取法在分离重要有效成分中的应

8、用，并能通过被分离化合物的结构分析实验结果3．掌握蒽醌类化合物的鉴定方法【实验原理】1、概述 虎杖为蓼科植物虎杖（PolygonumcuspidatumSieb.etZucc.）的干燥根茎和根。具有祛风利湿，散瘀定痛，止咳化痰的功效。虎杖中的成分主要含蒽醌的大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等游离蒽醌，大黄素-6-甲醚-8-O-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-D-葡萄糖苷等。尚含非蒽醌成分，主要是白藜芦醇葡萄糖苷，又称虎杖苷、云杉新苷，用于防止细胞癌变和恶性肿瘤的扩散，对艾氏腹