超声酶法提取黄柏中小檗碱的工艺研究论文

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1、超声酶法提取黄柏中小檗碱的工艺研究论文【摘要】目的研究超声酶法在黄柏中小檗碱提取中的应用效果。方法采用单因素实验和正交实验考察不同因素对超声酶法提取黄柏小檗碱的影响，优选提取工艺条件。结果水浴时间2.5h,超声功率80％,加酶25ml,水浴温度60℃时提取率最高。结论超声酶法应用于黄柏小檗碱的提取，具有提取率高、省时、高效、节能等优点。【关键词】黄柏小檗碱纤维素酶超声波ExtractionStudyofBerberinefromCortexPhellodendribyUltrasonic柠檬酸缓冲液（pH4.5），向各试管中加入0.5ml酶液，在其中一

2、支试管内立即加入1.5ml3，5二硝基水杨酸终止酶作用，作为空白与另3支试管一起在50℃水浴锅中保温1h。取出后在后3支试管中加入3，5二硝基水杨酸，然后一起在沸水中煮沸5min，冷却后定容至20ml。以空白液调零。在540nm下比色，由标准曲线查出所测A值对应的葡萄糖生成量。以上述条件，每小时由底物产生1μmol葡萄糖所需的酶量定义为1个酶活单位。2.1.5滤纸酶活力计算滤纸酶活力（U/g）依据公式：滤纸酶活力（U/g）=葡萄糖生成量（mg）×酶液定容总体积×5.56/［反应液中酶液加入量（ml）×样品重（g）×时间（h）］，1mg葡萄糖换算成μmol

3、：1000μg/180μg=5.56μmol,.freelg带入公式得：滤纸酶活力=547.104U/g2.2小檗碱的提取及标准曲线的绘制2.2.1粗提将黄柏5g碎成粉状，置烧杯中，加入1/10量的生石灰细粉，加水溶胀30min后，再加入30倍量水浸泡24h后纱布过滤，再用10%的盐酸将滤液pH值调至2～3，然后加入滤液体积10%的NaCl，放置过夜后抽滤，得到盐酸小檗碱的粗提物，此时还含有杂质。将盐酸小檗碱的粗提物用热水溶解并趁热抽滤，滤液冷却静止1h抽滤得到盐酸小檗碱与掌叶防己碱等的混合物，至此黄柏的粗提完毕［2］。2.2.2盐酸小檗碱标准曲线的绘制精密

4、称取盐酸小檗碱纯品10mg，置50ml容量瓶中，加95%的乙醇溶解并定容至刻度，作为盐酸小檗碱标准溶液。精密称取此液0.2，0.4，0.8，1.6，2.0ml于50ml容量瓶中，继续加95%乙醇至刻度并在348nm下测定吸光度值，y=0.8055x-0.0097。2.3纤维素酶-超声波对盐酸小檗碱提取率的影响取两组黄柏各5g，粉碎。在一组样品中加入150ml石灰水，在另一组中加入130ml石灰水和20ml浓度为5mg/ml的酶液。第一组样品浸泡24h后双层纱布过滤，第二组样品在60℃，功率为60%的超声波清洗器里超声清洗90min后双层纱布过滤，两组滤液用1

5、0%的盐酸调pH2～3，最后加入滤液体积10%的NaCl，放置过夜，抽滤，得两组盐酸小檗碱样品。用乙醇溶解并分别定容至50ml，在348nm下分别测其吸光度值，并在盐酸小檗碱标准曲线上查出各自的盐酸小檗碱。2.4提取条件的单因素考察2.4.1水浴温度对提取效果的影响称取干燥的黄柏粗粉5g左右，分别于20，40，60，80，100℃时加入20ml酶液，作用1.5h，结果在60℃时提取量比较高。2.4.2水浴时间的确定称取干燥的黄柏粗粉5g左右，于60℃时加入20ml酶液，分别作用0.5，1.0，1.5，2.0，2.5h，结果水浴1.5h时提取量比较高。表2纤维

6、素酶-超声波对盐酸小檗碱提取率的影响（略）2.4.3加酶量的确定称取干燥的黄柏粗粉5g左右，于60℃时加入酶液10，15，20，25，30ml，分别作用1.5h,结果加酶量为25ml时提取量比较高。2.4.4超声功率的确定称取干燥的黄柏粗粉5g左右，于60℃时加入酶液20ml，超声时间1.5h，超升功率分别为40%，50%，60%，70%，80%，结果超声功率范围为60%时，提取量比较高。2.5正交实验设计根据黄柏中盐酸小檗碱的提取条件，选定加酶量、温度、时间、超声功率4个因素，以L9（34）正交实验设计系统进行实验。因素水平见表3,正交表见表4。表3因素及

7、水平（略）表4正交实验（略）以上分析可以得出结论:各因素对实验指标(含量)的影响按大小次序来说应当是C(水浴时间)、D(超声功率)、A(加酶量)、B(水浴温度)，最好的实验方案应当是C3A2D3B2,即水浴时间2.5h,超声功率80%,加酶25ml,水浴温度60℃。2.6利用薄层色谱法检测纤维素酶、超声波对盐酸小檗碱成分的影响制备硅胶薄层板一块，取盐酸小檗碱标准样品、未用纤维素酶提取的盐酸小檗碱样品、用纤维素酶提取的盐酸小檗碱样品和用纤维素酶-超声波提取的盐酸小檗碱样品各0.5μl，点样。按CHCl3∶MeOH∶冰HAC=7∶1∶2的比例配制展开剂，将点样后

8、的薄层板放入层析缸中，待展开至规定距离时取出晾干。在