临床免疫测定技术课件.ppt

《临床免疫测定技术课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、临床免疫测定技术（各论）凝集试验WidalreactionWeil-felixreactionWrighttest:布鲁菌病交叉配血试验相关帮助需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的

2、，可以访问探生网biomean进行咨询，期待您的加入Widalreaction（试管内凝集反应）取：（1：10）待检血清3.0ml生理盐水3.0ml/管释度1:201:401:801:1601:3201:640待测血清的抗体效价（滴度）：即出现“++”凝集的最终血清稀释度血型鉴定（玻片凝集反应）（直接）+抗A标准血清+抗B标准血清待测RBC待测RBCA型B型乳胶凝集试验(间接)带现象Zonephenomenon前带prezone后带postzone1）正向间接凝集试验(用抗原致敏载体--检测Ab)2）反向间接凝集试验间接凝集—(用抗体致敏载体----检测Ag）3）间接凝集

3、抑制试验4)协同凝集试验(SPA抗体致敏------测抗原)反向间接血凝试验(测Ag)1/21/41/81/161/321/641/1281/2561/5121/1024Pos.Neg.Titer648512<232128324Patient12345678抗球蛋白抗体试验-commbs（抗RBC不完全抗体）A（间接法—游离）B（直接法—结合）：(Influidphase)絮状沉淀试验：AgAb环状沉淀试验(Ingelphase)singlegeldiffusiontest抗原浓度的标准曲线操作：抗体混于凝胶中抗原加入孔内抗原自由扩散测定沉淀环直径在标准曲线上查找相应抗原

4、浓度影响因素:1.抗原分子量：与扩散速度、沉淀环反相关2.抗体种类：兔抗血清优于马、羊3.抗体稀释度：抗体浓度大沉淀环小4.扩散时间：抗原含量高，扩散时间长5.扩散温度：4～37℃内温度与扩散速度正相关6.琼脂板厚度：与沉淀环反相关doublegeldiffusiontest原理:将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自在凝胶中向四周自由扩散，当抗原与抗体相遇，在比例合适时形成沉淀线。琼脂双向扩散试验的应用1.检测未知抗原或抗体2.抗原性质分析3.抗体效价滴定4.抗原或抗体纯度鉴定1.检测未知抗原或抗体A:浓度Ag、Ab及扩散率近似；B：浓度Ag、Ab近似，扩散率

5、Ag＞Ab；C：浓度Ag、Ab近似，扩散率Ag＜AbD：浓度Ag＞Ab，扩散率近似；E：浓度Ag＞Ab，扩散率Ag＞Ab；F：浓度Ag＜Ab，扩散率Ag＜Ab；2.抗原性质分析3.抗体效价滴定4.抗原或抗体纯度鉴定免疫浊度试验(略)免疫球蛋白的检测（简）健康人血清Ig含量（g/L）免疫固定电泳（测M蛋白）CH50(complementhemolysis50%).原理：组分和功能完整的补体系统能使抗体致敏的羊红细胞（SRBC）发生溶血反应。在一定范围内，SRBC溶血程度与补体总活性成正相关。以溶血百分率作纵坐标，相应的血清量为横坐标绘图，在一个适当的、稳定的反应体系中，溶血程度

6、与补体剂量依赖呈一个S形曲线Enzymelinkedimmunosorbentassay（ELISA）原理（Principle）：将抗原或抗体结合到某固相载体表面，保持其免疫活性，测定时,把被测sample和conjugate按不同的步骤与固相载体上的immunosorbent反应。用洗涤的方法使与固相载体上形成的immunocomplex与其他物质分开，再加入酶反应substrate，经酶的催化作用后substrate变为有色产物。产物的量与标本中被检物的量直接相关。ELISA操作的基本步骤：标本的收集、运送和保存试剂准备加样温育洗板显色比色结果判断结果报告及解释1、标本

7、的收集、运送和保存ELISA检测分析用标本—血清（浆）特殊项目用：唾液、脑脊液、尿液、粪便等ELISA检测分析的对象—病原体抗原/抗体Tumormark、hormone、cytokineetal采集、运送与保存的注意点：采集时间、运送条件、暂存点温度可能影响测定结果的标本因素一、内源性（标本内）类风湿因子（rheumatoidfactor）补体（complement）异嗜性抗体（heterophilicantibody）治疗或诊断用鼠抗体（抗鼠抗体）自身抗体或溶菌酶等二、外源性（操作）溶血、反复冻融细菌