雅培抗-HCV操作规程.doc

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1、1、目的为了规范雅培丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒的检测工作，保证血液检测结果的准确性、正确性和可靠性，保障血液质量，根据《》制定本操作规程。2、职责血液检测岗位人员负责献血者血液标本丙型肝炎病毒抗体的检测。3、适用范围适用于献血者血液标本丙型肝炎病毒抗体的检测。4、原理在Murex抗-HCV4.0试剂中，稀释后的样品与包被在微孔板上的超纯度的核心。NS3，NS4，NS5抗原一起孵育，样品中的抗-HCV抗体与包被抗原结合。通过洗涤去除未结合的物质，被捕捉的抗体和过氧化物酶标的抗人IgG单克隆抗体孵育形成抗原-抗体-酶结合物，通过洗涤去除多余的酶结合物后，加入

2、底物TMB和过氧化氢显色，当样品中有抗-HCV抗体存在，颜色呈紫色。加入硫酸终止酶反应，应用酶标仪测吸光值，样品中的浓度与颜色深浅有直接关系。5、标本要求5.1血液标本容器和添加（抗凝）剂分离胶试管或不抗凝试管5.25ml静脉血离心分离后的血清或血浆（血辫）。6、所需仪器设备微量振荡器、可调微量移液器、电热恒温水浴箱、离心机、全自动酶免检测系统（STARLET前处理和FAME16/20后处理）、MUTISKANMK3酶标仪、汇松洗板机、定时器。7、试剂材料7.1一次性移液器（与微量加样器配套），一次性加样尖（与STARLET配套）、量筒、蒸馏水。7.2贴

3、有本站质量管理科“质检合格”标签的由MurexBiotechS.A.(PTY)Ltd.生产的丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（ELISA）。康彻思坦生物或卫生部临床检验中心提供的弱阳性质控血清。8、检测环境要求温度18-25℃，湿度30%-70%。9、步骤与方法9.1实验前的准备9.1.1环境确认观察实验室环境温度、湿度是否在要求范围内，如不在范围应使用空调、加湿器等设备使检测环境条件符合要求。9.1.2仪器设备的准备对本次检测需用的设备MUTISKANMK3酶标仪、汇松洗板机、微量振荡器、可调微量移液器运行状态和37℃水浴箱的温度及环境温湿度进行确认，按《M

4、UTISKANMK3酶标仪操作规程》和试剂盒说明书编制结果判读程序（如酶标仪中贮存有相应的程序可直接调用）。按《汇松PW-960洗板机操作规程》和试剂盒说明书编制编制洗板程序（如洗板机中贮存有相应的程序可直接调用）。如使用全自动酶免分析系统进行实验，应进行仪器初始化。详见《FAME16/20操作规程》及《全自动酶免分析系统实验操作规程》9.1.3试剂的准备（1）从冰箱中取出雅培丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒和抗-HCV标准物质（质控血清）。对标准物质(质控血清)的含量、批号、有效期、外观、容量和开始使用日期等是否符合要求等内容进行确认；如标准物质(质控血清)

5、为冰冻保存的，应待其完全溶化。（2）对丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒应检查的外包装，字迹是否清晰、内容是否齐全、是否有质量管理科抽检并贴有“质检合格”标签，是否在有效期内、试剂盒内组分是否齐全、液体组分是否澄清均匀无异物、是否无溢液及渗漏等。（3）将试剂盒于室温放置30分钟以上，使其温度平衡到室温，并充分混匀各试剂。（4）如果使用自动加样器和酶免后处理进行实验，进行如下操作：将试剂槽和阴阳性对照，以及质控品载架从冰箱中取出，放置平衡至室温，检查试剂槽内液体和阴阳性对照，以及质控品等是否对应载架上的相应位置，是否足量，是否在一周之内开启，质控品是否变质，是否混

6、浊，新开启的质控品应标明时间。如果不足应将试剂倒入相应仪器试剂槽中。试剂倒入前应检查试剂瓶标识和仪器试剂槽标识，防止试剂错误倒入。（5）将浓缩洗液用蒸馏水按20倍比例稀释，按实际需要，配制适量的工作洗液。浓缩洗液使用前检查是否有结晶出现，若出现结晶，应置于37℃至溶解后再使用。如使用酶免后处理器进行实验，进行如下操作：将配好的洗液倒入相应的仪器洗液瓶中，洗液倒入前应检查原洗液瓶标识和仪器洗液瓶标识，防止倒入错误，然后将洗液瓶置于酶免后处理器洗板架上待用。9.1.4实验微板的准备（1）经平衡后，从密封袋中取出微板后，检查酶免板板底是否无划痕、平整，用手轻压

7、微板检查，使之平整；并且检查微板孔内有无异物。（2）计算所需的孔数。每板3孔阴性对照，2孔阳性对照，1孔质控。加样示意见图1.根据检测标本数量及对照孔数量，把需用的微孔板条拼组于微孔板架上，微孔板条必须平放于微孔板架上，各微孔在同一水平高度，避免高低不平。（3）如使用全自动酶免分析系统，应在余板空位上用清洁的废旧板条补满板，补齐后应用手轻压微板检查，使之平整。再放置于仪器相应位置执行《STARLET的使用和维护保养操作规程》及《全自动酶免分析系统实验操作规程》？。9.1.5标本的准备将离心处理后的标本放置在标本槽内，标本需要插入标本槽底部，献血条码面对着

8、标本槽缺口处，如手工检测应将标本编流水号，放入试管架上。9.2实验操作（全自动检